2。2。4 接种 9
3。 结果与分析 10
3。1线性化结果 10
3。2接种后植株表型 11
3。3表型观察与分析 12
4 讨论与展望 13
4。1讨论 13
4。2 展望 14From~优Y尔R论^文W网wWw.YoUeRw.com 加QQ7520.18766
参考文献 15
致谢 16
1。 相关背景介绍
1。1拟南芥
拟南芥(Arabidopsis thaliana),是十字花科的一种小型的野草。虽与甘蓝、白菜等植物同科,却没有丝毫经济价值,它的价值在应用于植物生理学等研究上。作为生物学最经典的模式植物之一,拟南芥有着许多无法被替代的优点:比如基因组小、生长周期短、生长空间小等等。由于具有农杆菌介导的有效转化途径,拟南芥拥有大量的突变体和基因组资源,因此,在遗传学研究中也备受青睐[1]。
1。2本氏烟草
本氏烟草(Nicotiana Benthamiana),是澳大利亚所特有的一种烟草属植物。相对于其他烟草植物而言,本氏烟草有着显著的易感染性,能够敏感地表现出所感染病毒的病征。该物种的基因测序工作也已经完成,这使得本氏烟草有更多可供参考的基因信息。由于农杆菌渗透法能很方便地完成蛋白质的瞬时表达,本氏烟草常被用作生物工厂来生产异源蛋白。同时,由于其可以作为多种病原微生物的宿主,也常被选作进行病毒诱导的基因沉默(VIGS)实验的材料[2]。论文网
1。3核糖体的生物学功能
核糖体(ribosome),也曾称为“核糖核蛋白体”或者“核蛋白体”,在所有的活细胞中都有发现,是细胞中一种相对简单的细胞器。核糖体的主要成分是相互缠绕的核糖体RNA(ribosomal RNA,rRNA)和核糖体蛋白质(ribosomal protein,RP)。其中,核糖体RNA大约占核糖体的2/3,核糖体蛋白大约占1/3。核糖体是细胞内蛋白质合成的场所,能读取mRNA的核苷酸序列所包含的遗传信息,并将之转化为蛋白质中氨基酸的序列信息以合成蛋白质。
在结构上,一大一小两个亚基以及rRNA构成了核糖体。rRNA处于核心位置,而两个亚基则通常定位于核糖体的表面,或填充于rRNA之间的缝隙。大多数核糖体蛋白有一个球形结构域和伸展的尾部,球形结构域分布在核糖体表面,尾部则伸入折叠的rRNA中。在核糖体大小亚基的结合面分布有4个RNA分子的结合位点,其中1个位点供mRNA结合,3个共tRNA结合[3]。
核糖体存在于原核生物和真核生物的细胞中。一般而言,原核细胞中只存在一种核糖体,即70S核糖体,由30S的小亚基和50S的大亚基组成;而真核细胞中则存在两种核糖体,即80S核糖体和55S核糖体,其中80S核糖体由40S的小亚基和60S的大亚基组成,55S核糖由28S的小亚基和39S的大亚基组成,存在于线粒体中。
核糖体蛋白命名的依据是其所在的核糖体的大小亚基,小亚基核糖体蛋白为S1到S31,大亚基核糖体蛋白为L1到L44。其中核糖体蛋白L10(RPL10)是大亚基核糖体蛋白的一种[4]。
1。4 VIGS
病毒诱导的基因沉默(virus induced gene silencing,VIGS)最初被用来描述植物被病毒侵染后的一种恢复现象,现在具体是指携带目标基因片段的病毒侵染植物后,可诱导植物内源基因沉默、引起表型变化,进而可以根据表型变异研究目标基因的功能[5]。VIGS是根据植物对RNA病毒防御机制发展起来的一种技术,是一种转录后水平的基因沉默(post-transcript gene silence)。与传统的基因功能分析方法相比,VIGS能够在接种植株上出现表型,具有速度快、高通量、能在不同基因背景下研究等优点,因此VIGS被广泛应用于植物抗病抗逆、生长发育以及代谢调控等生理途径相关基因的功能鉴定。目前,已有多种DNA和RNA病毒可被改造为VIGS载体[6]。文献综述