β-1，3-葡聚糖酶LamC的结晶条件筛选(2)
2. 材料与方法
2.1菌株
用于LamC表达的工程菌株Origami 2（DE3)-pET 32a-lamC。
2.2培养基与溶液
1. LB（Luria-Bertani）培养基
5 g/L 酵母浸出物，10 g/L 胰蛋白胨，10 g/L 氯化钠， p H 7.0。121℃，高压蒸汽灭菌 20 min。固体LB培养基则添加15 g/L琼脂。
2. 卡那霉素（Km）
称取卡那霉素5 g，溶于100 ml 水，配成50 mg/mL的母液，过滤除菌，4°C贮存，使用浓度为50 μg/mL。
3. 诱导剂：异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（IPTG）
称取IPTG 23.8 g，溶于100 ml 水，灭菌水配成1M的母液，过滤除菌，-20°C贮存，使用浓度为1 mM.
4. 1.5 M Tris-HCl（pH8.8）
称取181.7 g Tris，加约900 mL去离子水揽拌至完全溶解，然后用浓HCl调pH值至8.8，将溶液定容到1000mL后，室温保存。
5. 1M Tris-HCl（pH6.8）
称取121.1 g Tris，加入约900 mL去离子水揽拌至完全溶解，然后用浓HCl调pH值至6.8，将溶液定容到1000 mL后，室温保存。
6. 30％Acrylamide
称取丙烯酰胺290g，N,N’-亚甲基双丙烯酰胺10g，溶解于800ml去离子水，将溶液定容到1000 mL，用0.45μm滤器过滤后于棕色瓶中保存。
7. 10％（W/V）SDS
称取10g SDS,加入约90 mL去离子水70°C加热溶解，然后用HCl调pH值至7.2，将溶液定容到100 mL，室温保存。
8. 5×SDS-PAGE 电极缓冲液
称取Tris粉末15.1g、Glycine（甘氨酸）94g、0.5%(W/V)SDS5.0g，溶解于 800ml 去离子水，搅拌至完全溶解，将溶液定容到1000 mL后，室温保存。
9. 10％（W/V）过硫酸铵
称取1 g过硫酸铵，加入10 mL的去离子水后搅拌溶解。
10. 考马斯亮蓝R-250染色液
称取1g考马斯亮蓝-250，加入250 mL异丙醇和100 mL冰醋酸搅拌至完全溶解，定容至1000 mL后，用滤纸去除颗粒物质，室温保存。
11．考马斯亮蓝染色脱色液
加入100 mL冰醋酸和50 mL乙醇搅拌至完全溶解，定容到1000 mL，充分混合后使用。
12．2 M咪唑
称取咪唑13.62 g，加入90 mL去离子水完全溶解，浓HCl调pH 7.4，定容至100 mL，0.45μm滤膜过滤除去杂质。用20M Tris-HCl（pH7.0）分别稀释成20mM、50mM、100mM、200mM、300mM咪唑，备用。
13. PBS缓冲液
Content concentration（g/L）
NaC l8
KCl 0.2
Na2HPO4 2.9
K2HPO4 0.27
加入约900 mL去离子水搅拌至完全溶解，将溶液定容到1000mL后，调pH至7.3，室温保存。
2.3 结晶试剂及器材
Crystal Screen 1，Crystal Screen 2，Crystal Screen lite, Crystal Screen Cryo, Index和Additive Screen试剂盒及常规蛋白质晶体操作所需工具购自Hampton research。
48槽双孔坐滴结晶板均购自博亚捷晶科技（北京）有限公司。15L保存以及运输晶体所需液氮罐购自四川亚西橡塑机器有限公司。晶体生长用恒湿箱购自华利达实验仪器厂，解剖镜Nikon SMZ-10，冷光源南京天龙光学仪器厂LGY250H型LED光源。