转PpCBF海滨雀稗抗寒性分析 (2)
海滨雀稗具有很强的耐盐性，是我国目前用于滨海滩涂和盐碱地绿化改良的一种品质优良的草种。但是由于海滨雀稗为暖季型草坪草，因此在长江以北的广大地区容易遭受冷害、冻害，从而造成越冬困难，无法正常生长。培育具有抗寒性海滨雀稗新种质，可以使草种的应用范围向北拓展，在北方沿海地区作为城市绿化和建设滩涂生态环境的优良草种，具有极高的实践意义。
DREB/ CBF转录因子在有花的植物中广泛地被发现，属于AP2 / EREBP家族的转录因子，具有保守AP2 / EREBP结构域（冈室等人，1997; Jaglo等人，2001）。它特异性地结合到DRE / CRT元件，调节在含有DRE / CRT元件启动子的应激反应基因的类型中的表达，增加对各种逆境植物的抗性和适应性。
CBF是参与耐寒性通路的调控是ABA非依赖的途径。在低温下作为ICE蛋白本身结合的活性，ICE蛋白首先由ICE蛋白接收到来自上级传递，然后激活ICE蛋白接收低温度信号，特异性地结合到CBF基因的启动子区，然后CBF开始表达，再耦合到AP2 DNA结合，调控CBF下游基因的表达，提高植物抗冷能力。
CBF基因在冷害过程中起着十分重要的作用。 如果CBF基因缺失，其突变体植株的抗冷能力将会显著下降。反义CBF1和反义CBF3拟南芥抗冷能力下降，经过低温处理后，其比野生型拟南芥的半致死温度高1.5℃，经过低温胁迫后的半致死温度约-8.5℃。CBF基因起着冷过程中起重要作用。在拟南芥CBF的超表达，表现的是抗冻蛋白，防冻物质游离脯氨酸和可溶性糖的积累，并显示出改善拟南芥的抗冻能力。（吕胜男，2011）
许多的研究结果说明，DREB / CBF的超表达是拟南芥对于冷，干旱和高盐胁迫耐受能力的提高（Liu等人，1998; Jaglo等人，1998,2001）。组成型DREB1 / CBF基因的表达，诱导COR基因的表达在不存在冷应激的情况下，可以提高转基因植物的耐寒性。与野生型拟南芥植株和未经冷处理的转基因植物相比，具有超表达CBF3基因的植株体内多种代谢物（可溶性糖和脯氨酸）被累积，且具有高耐寒性（Gilmour等人，2000，2004）。
拟南芥通过超表达CBF4转录因子，下游基因，包括启动子区的CRT / DRE元件，被激活，同时提高了转基因植物的耐寒性和干旱耐受性的表达（哈克等人，2002）。 Hsieh等人（2002）将包括CBF1基因的表达载体转移到番茄。结果表明：T1和T2转基因番茄的耐寒性比野生型更强。伊藤等人（2006）使用OsCBF转化水稻后，发现了脯氨酸和可溶性糖的含量增加，耐寒，耐干旱性和耐盐性的能力提高的转基因水稻植株。Al-Abed等（2007），将拟南芥属基因CBF3引入玉米，提高玉米的耐寒性，同时还具有改善干旱耐受性和耐盐性的能力。草坪草方面，Li 等（2006）将 CBF1/DREB1B 基因导入中华结缕草后，植株抗低温能力增强；贺杰等(2006)通过农杆菌介导将拟南芥CBF1 基因导入中华结缕草中并表现出了一定的抗冷性；吴关庭等(2005)将拟南芥CBF1 基因导入4 个高羊茅品种中，获得的转基因植株耐逆性有所增强。
1.材料与方法
1.1试验材料
转PpCBF海滨雀稗株系2个，由南京农业大学草类逆境生理与分子生物学实验室提供。
1.2转PpCBF海滨雀稗植株的扩繁
2016年10月将2个转PpCBF海滨雀稗株系及野生型植株通过扦插扩繁后，移栽至花盆中，其基质为田园土∶草炭∶砂=1∶1∶1，并混入46 g kg-1有机肥。待植株生长一致后用于后续实验。
1.3试验设计
1）将生长一致的转基因株系与野生型对照植株转入人工气候箱，进行预培养，培养条件为：昼夜温度为25℃/20℃，相对湿度为70%，光照时间为14 h/d，光照度为622 μmol m-2 s-1。
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