9)在405nm波长下,用酶标仪测定吸光度值。,
超氧化物歧化酶(SOD)活力测定如下:其中所用试剂除双蒸水外均来自SOD试剂盒。
1)准确称取取1g组织,加入9倍体积的PBS缓冲液,在冰水浴中利用电动研磨棒研磨,制备匀浆。
2)在4℃,3000转/分,离心10分钟,取上清。
3)按照如下步骤在酶标板中添加试剂对照孔中添加20μL双蒸水、20μL酶工作液和200μL底物应用液。对照空白孔试剂添加为20μL双蒸水、20μL酶稀释液和200μL底物应用液。测定孔为20μL待测样本、20μL酶工作液和200μL底物应用液,测定空白孔为20μL待测样本、20μL酶稀释液和200μL底物应用液,每个样品做2个重复。
4)在37℃孵育20分钟。
5)在450nm波长下,用酶标仪测定吸光度值。
谷胱甘肽过氧化物酶活力测定方法:所用试剂均为该试剂盒内试剂
1)制备充分研磨的组织奖匀浆。文献综述
2)向对照管加入0。2毫升1mmol/LGSH,测定管则加入0。2毫升1mmol/LGSH以及0。1ml待测匀浆,37摄氏度水浴5分钟,各加入0。1ml试剂一应用液,37摄氏度水浴5分钟,各加入2ml试剂二应用液,混匀,3500-4000转/分离心10分钟,取1ml上清液作显色反应。
3)空白管加入GSH标准品溶剂应用液和试剂三应用液1ml、以及0。25ml试剂四应用液、0。05ml试剂五应用液。标准管加入1ml20umol/LGSH标准液以及与空白管相同等量的后三种试剂。对照管加入1ml上清液以及1ml试剂三应用液、0。25ml试剂四应用液、0。05ml试剂五应用液。测定管加入与对照管种类和计量相同的试剂。
4)混匀,室温静置15分钟后,在412nm处,1cm光径比色杯,双蒸水调零测各管OD值。
结合谷胱甘肽过氧化物酶测定的OD值和过氧化氢酶以及超氧化物歧化酶的吸光度值,根据三种酶活的相关计算方法得出相应的酶活力。