2。2。3 PCR电泳无条带的原因 15

2。2。4 凝胶电泳拖带的原因 15

2。2。5大肠杆菌转化后涂布培养没有或极少菌落的原因 16

参考文献 17

致谢 17

引言

拟南芥（Arabidopsis thaliana），是植物遗传和发育研究中的重要模式作物之一。拟南芥天然自花授粉，世代时间短，生存所需空间小，基因组小且高度纯合，便于进行功能基因组分析，用理化因素处理突变率很高，容易获得各种代谢功能的缺陷型[1]。来自优W尔Y论W文C网WWw.YoueRw.com 加QQ7520,18766

在自然界中，植物能否开花结果对其整个物种的生存、繁衍、进化是十分重要的。因此，研究植物开花过程中植物体内各分子物质相互作用，以及各分子物质对于开花过程中各种花器官形成发育的调控，是近几年植物届乃至生物界研究的热门课题。该领域的相关研究将对农业生产和园艺发展产生深远影响。

拟南芥通过光周期途径、春化途径、自主途径及赤霉素途径成花[2]。FT是最重要的开花整合子基因，整合了除赤霉素途径外的其他几个开花影响途径，是开花起始的重要开关[3-4]。FT基因编码一个分子量小于20kD的蛋白质，结构与磷脂酰乙醇胺结合蛋白(PEBP)相似 [5-7]。拟南芥FT和 SOC1基因是CO的直接靶基因[8]。FT蛋白可以从叶片长距离运输到芽的顶端长距离。FD和FT通过蛋白互作，激活花分生组织特异性基因AP1，从而促进开花[9]。FT基因及其同源基因的表达产物不仅以成花素的形式参与了开花调控，还参与了许多其它发育过程的调控[10]。论文网

SODIUM POTASSIUM ROOT DEFECTIVE1（nakr1；以前被称为npcc6）编码一个由319个氨基酸组成的在韧皮部伴细胞特异表达的一种可溶性的金属结合蛋白[11]。基于NaKR1缺失造成的韧皮部功能缺陷，nakr1-1突变体表现出高Na+、K+、Rb+，叶片淀粉含量高，短根，晚花，蔗糖的长距离输送缩短等特点[12-13]。nakr1-1突变体在长日照下表现出很严重的晚花，这种现象可能与FT蛋白的产生及转运有关。本课题主要通过构建NaKR1的酵母载体，从而研究拟南芥NaKR1和开花相关基因，如FT等是否互作。

1。材料与方法

1。1。实验材料

1。1。1。植物材料

拟南芥野生型

1。1。2。菌株与载体

大肠杆菌（E。 coli）DH5α购买自GeneCopoeia 公司，Trans1-T1购买自TransGen Biotech公司；

PGADT7载体和PGBKT7载体军由本实验室提供。

1。1。3。试剂与仪器

1) 分子生物学试剂：

限制性内切酶（NdeI-HF，EcoRI-HF），购买自 BioLabs 公司；

PrimerSTAR HS DNA Polymerase，dNTP Mixture，DNA Marker，T4 DNA ligase购买自 TaKaRa 公司；

2×Taq MasterMix(含染料)购买自康为世纪公司；

2) 常用化学试剂：文献综述

Agarose、Tryptone、Yeast extract、NaCl购买自 Sangon 公司；

酚/氯仿（Phenol / chloroform）（25:24，PH5。2）购自 Amresco 公司；

异丙醇、无水乙醇、氯仿购自华东医药；

3) 实验仪器：

电子天平购买自 Mettler Toledo 公司；

电热恒温干燥箱购买自 Memmert 公司；

凝胶成像仪，凝胶电泳仪购买自 Bio-Rad 公司；

冷冻离心机5830R，恒温孵育器（ThermoStat plus）均购买自 Eppendorf 公司；