摘    要拟南芥全基因组序列已知，是一种重要的模式植物，也是植物遗传学、分子生物学、发育生物学研究的重要材料。拟南芥DWF5基因被报道编码了植物激素油菜素内脂BRs的合成酶，其基因功能缺失会导致BRs合成受阻出现缺乏症，但其对植物生长发育的作用和机制尚缺乏深入研究。本研究以拟南芥DWF5基因为出发点，分析其基因及蛋白质序列，预测潜在功能结构域；获取拟南芥T-DNA插入失活突变体dwf5，设计验证引物，进行突变体真实性验证，并获取纯合植株；检测突变体中DWF5基因表达量及确认植株表型，为进一步分析研究该基因的功能和调控机制提供实验材料和参考。90415

毕业论文关键词：突变体；DWF5基因；拟南芥；T-DNA；表型

Abstract Arabidopsis’ genome sequences are well-published, which makes it an important model plant commonly used in genetics, molecular biology and developmental biology research。 Arabidopsis DWF5 gene was reported to code synthetase of plant hormones BRs, the loss of which will lead to deficiency in BRs synthesis。 However, its effect and mechanism in regulating plant growth still remains unclear。 In this study, the Arabidopsis DWF5 gene and its protein sequences were analyzed, the potential functional domains were predicted。 The presumed Arabidopsis T-DNA insertion mutant of dwf5 was obtained; primers were designed to verify the authenticity of this mutant。 The homozygous plants were obtained and the expression of DWF5 gene was detected in both control wild-type plant and mutant。 The dwarf phenotype of dwf5 mutant was verified, which provide new data for further study on its regulatory mechanism。

Key words: Mutant; DWF5 gene; Arabidopsis; T-DNA; phenotype

 目   录

引言 4

1 材料与方法 5

1。1 材料 5

1。2 主要试剂和仪器 5

1。3 基因及编码蛋白生物信息学分析 5

1。4 突变体验证 5

1。4。1 植物基因组DNA的提取 5

1。4。2 三引物扩增法验证纯和突变体 6

1。5 基因表达检测 6

1。5。1 植物RNA的提取 6

1。5。2 逆转录获取cDNA 7

1。5。3 RT-PCR检测基因表达源Q于W优E尔A论S文R网wwW.yOueRw.com 原文+QQ75201,8766 量 7

1。6 表型观察 7

2 实验结果 8

2。1 DWF5基因及编码蛋白序列分析 8

2。2 纯合dwf5突变体及验证引物设计 9

2。3 纯合dwf5突变体的PCR验证 10

2。4 纯合dwf5突变体基因表达检测及植株表型 11

3总结与讨论 12

参考文献 13

引言

    拟南芥（Arabidopsis thaliana）又名阿拉伯芥，是一种十字花科植物，广泛应用于植物遗传学、发育生物学和分子生物学的研究，已经成为一种典型的模式植物，其主要原因如下：拟南芥植株形态个体小，生长周期快，从播种到收获种子一般只需6周左右；种子多，每株每代可产生数千粒种子；形态特征简单，生命力强，用普通培养基就可以作人工培养；基因组小，只有5对染色体；拟南芥是自花授粉植物，基因纯合度高，容易用理化因素处理，突变率高，便于获得各种代谢功能的缺陷型。拟南芥全部基因组测序已经完成，每个单倍染色体组（n=5）的总长只有7000万个碱基对，预测共有29,454个基因。这样就可以准确定位插入DNA的位置。