② 去上清，在离心管中加入冰的预冷的150µLP1，剧烈震荡，使管内液体呈现浑           浊

③ 加入150µLP2，轻轻摇晃离心管，使管内浑浊变透明（此过程不应超过3min）

④ 加入200µLP3，轻轻摇晃离心管，使管内透明变浑浊（出现丝状蛋白），静置           3min后，摇散丝状蛋白（不宜过散）

⑤ 离心机中13000rpm，5min离心后，取450µL上清于一新的离心管中，加入2。           5倍体积的无水乙醇（563*2µL预放入冰箱），混匀后放入冰箱20min

⑥ 取出离心管，13000rpm，5min离心后，弃上清，再重复进行一次上步操作

⑦ 取出离心管，13000rpm，5min离心后，弃上清，再空管离心5min ，倒去残            液

⑧ 离心管开盖 ，于空气中5-10min 晾干无水乙醇后，在管中加入20-30µLTE缓           冲液（加适量RNA酶），多次吹吸使质粒溶解于缓冲液

⑨ 取5µL提取后的质粒进行琼脂糖凝胶电泳检验，鉴定正确即质粒提取成功

2。2。1。2 PCR扩增cat片段

   设计一对引物ssrA-pKD3-F/ssrA-pKD3-R，以提取后获得的pKD3质粒为模板，PCR扩增Cat抗性序列和ssrA部分序列，获得目的片段ssrA1-CAT-ssrA2，上下游引物扩增片段大小应约为1405bp。