摘要：本实验使用农杆菌介导转化法，介导β-葡萄糖苷酶cel1基因向里氏木霉Rut C-30的转化。关于真菌转化的方法有很多，而农杆菌介导转化法其传统方法相比转化效率更高。实验中我们通过这种高效转化方法实现了里氏木霉的定向转化，为后续研究cel1a基因对纤维素酶诱导表达和对纤维素酶影响做准备。91522

毕业论文关键词：根癌农杆菌，转化，里氏木霉，纤维素酶

Abstract: Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation (ATMT) is used in this study to introduce β-glucosidase gene cel1a into Trichoderma reesei Rut C-30。 Many transformation methods can be used to transform fungi, but the ATMT method results in higher transformation frequencies compared with conventional method。 In this experiment, we used the method of efficient transformation to realize the directional transformation of Trichoderma reesei。 Making the preparation for the study of cel1a gene for cellulase induced expression and cellulase effect。

Keywords: Agrobacterium tumefaciens; transformation; Trichoderma reesei；cellulase

目   录

1 前言 5

1。1 纤维素的应用现状 5

1。2 纤维素酶 5

1。3 β-葡萄糖苷酶 6

1。4 里氏木霉 6

1。5  ATMT法简介 7

1。5。1   ATMT法特点 7

1。5。2 影响ATMT法转化效率源G于J优L尔V论N文M网WwW.youeRw.com 原文+QQ75201`8766 的因素： 8

2 材料与方法 8

2。1 材料 8

2。1。1 菌株： 8

2。1。2 培养基 8

2。2 方法 9

2。2。1 根癌农杆菌转化及鉴定 9

2。2。2 农杆菌介导里氏木霉的转化 9

2。2。3  PCR鉴定 10

3 结果 10

4 小结和讨论 12

参考文献 13

致谢 14

1 前言

1。1 纤维素的应用现状

地球上的纤维素资源十分丰富。它是以葡萄糖为单位，通过糖苷键连接而成的高分子聚合物，纤维二糖可看成它的二糖单位（结构式如图1）。天然纤维素在工业上主要应用于纺织、造纸、医药、建筑、废水处理等行业。人们通过物理、化学等方法对天然纤维素进行改造[1]，经改性后的纤维素在稳定性、耐磨性、阻燃性等方面展现出了更大的优越性。在纤维素的众多应用中，最为吸引人的是利用纤维素制取新能源——燃料乙醇，从而使纤维素成为石油等不可再生能源的代替能源，这对解决能源短缺，保护环境等具有重大意义。但由于纤维素降解成本的限制，燃料乙醇的使用受到了限制。[2]。目前纤维素的降解方法包括：酸降解、碱降解、机械降解、酶解等[3]。其中以酶解法副产物最少，是工业上降解纤维素最常使用的方法。但现有纤维素酶获得及其活力都不适于工业生产。目前人们通过基因工程和蛋白质工程对纤维素酶的性质进行优化，以满足生产需求。

图1 纤维素分子结构式

1。2 纤维素酶来自优I尔Y论S文C网WWw.YoueRw.com 加QQ7520~18766