摘 要：本文是关于重组马克斯克鲁维酵母产木聚糖酶的酶学性质研究。从本实验室 保存的含目的基因的大肠杆菌菌株中提出质粒 BPV2，经过 NotI 和 KpnI 双酶切得到目的基 因，并获得相同的粘性末端。再利用 T4 DNA 连接酶将目的基因与表达载体 pKLACl 连接， 导入到感受态大肠杆菌 DH5a 中扩增。再次提出质粒，并用 ScalI 酶将重组质粒线性化后以 便导入受体细胞中。制备马克斯克鲁维酵母的感受态，将线性化质粒通过电转化导入酵母 中，利用乙酰胺为氮源筛选转化子。挑取阳性菌落，扩增培养工程菌，并使其表达。93514

毕业论文关键词：木聚糖酶；真核表达；马克斯克鲁维酵母

Abstract: This article is about the study on the enzymatic properties of recombinant Kluyveromyces Marx producing xylanase。 The plasmid BPV2 is preserved in our laboratory with the target gene of Escherichia coli strains, NotI and KpnI after double digestion by gene, and got the same sticky ends。 Then using T4 DNA ligase gene linked with expression vector pKLACl feel, into Escherichia coli DH5a and amplificated。 Put forward again and the linearized plasmid, plasmid to import receptor cells with ScalI。 The recombinant enzyme preparation competent Marx kluyveromyces, the linearized plasmid was transformed by electroporation into yeast, then using acetamide as nitrogen source screening transformants to select positive clones。 The engineering bacteria was amplified and cultured。 After that, this gene was impelled to express。

Keywords：Xylanase，Eukaryotic expression，kluyveromyces marxianus

目 录

1 前言 6

1。1 木聚糖酶概述及动态研究 6

1。2 马克斯克鲁维酵母的表述 6

2 材料与方法 7

2。1 材料 7

2。1。1 质粒和菌株 7

2。1。2 主要仪器和设备 7

2。1。3 酶和主要试剂 7

2。2 主要试剂及培养基的配置 8

2。3 实验方法 8

2。3。1 目的基因的提取 8

2。3。1。1 提取含目的基因的质粒 8

2。3。2 目的基因与载体的结合 9

2。3。2。1 酶切 9

2。3。3 目的基因和表达载体的连接 9

2。3。4 重组子导入受体细胞 10

2。3。4。1 连接并转化大肠杆菌 DH5α感受态细胞 10

2。3。4。2 重组子的线性化处理并回收 10

2。3。4。3 马克斯克鲁维酵母感受态的制源C于H优J尔W论R文M网WwW.youeRw.com 原文+QQ752-018766 备及电转化 10

2。3。4。3。1 感受态制备方法： 10

2。3。4。3。2 马克斯克鲁维酵母电转化 11

2。4 重组子酶活力测定 11

3 结果与分析 12

3。1 目的基因的获取 12

3。2 表达质粒 pKLACI 的提取 12

3。3 重组质粒的构建及验证