摘 要：本实验先确定黑曲霉中木聚糖酶诱导的最佳时间，然后利用黑曲霉的菌丝球进行 黑曲霉总 RNA 的提取，根据已合成的特异性引物，构建合适的扩增体系，利用 RT-PCR 的 方法先进行反转录合成 cDNA 的一条链，后合成完整的木聚糖酶基因。将 RT-PCR 的产物 与 pUC-T Simple 进行连接后导入大肠杆菌中进行蓝白斑筛选。选取白色菌落放入含有 Amp 的 LB 液体培养基中进行过夜培养，提取质粒进行双酶切验证重组质粒是否正确。85856

毕业论文关键词：黑曲霉，木聚糖酶，基因克隆，RT-PCR

Abstract: The optimal time for xylanase induction in Aspergillus niger was determined by this experiment,and then the extraction of total RNA from Aspergillus niger was carried out using mycelium of Aspergillus niger。According to the specific primers that have been synthesized, a suitable amplification system is constructed。RT-PCR method was used to reverse the transcription of cDNA synthesis of a chain, after the synthesis of complete xylanase gene。The product of RT-PCR was ligated with pUC-T Simple and then introduced into E·coli for blue-white screening。White colonies were selected and placed in LB medium containing Amp for overnight culture。 The plasmids were extracted and digested to confirm whether the recombinant plasmids were correct。

Keywords：Aspergillus niger, xylanase, gene cloning, RT-PCR

目 录

1 前言 6

1。1 木聚糖 6

1。2 木聚糖酶 6

1。3 木聚糖酶的应用 6

1。3。1 木聚糖酶在造纸行业的应用 6

1。3。2 木聚糖酶在饲料行业的应用 6

1。3。3 木聚糖酶在食品行业的应用 7

1。4 木聚糖酶基因的克隆 7

1。5 选题目的 7

2 材料与方法 8

2。1 材料 8

2。1。1 菌种与载体 8

2。1。2 酶类与试剂 8

2。1。3 培养基 8

2。1。4 主要仪器 9

2。2 实验方法 9

2。2。1 黑曲霉的培养 9

2。2。2 黑曲霉总 RNA 的提取 10

2。2。3 木聚糖基因的克隆 11

2。2。4 双酶切法鉴定 12

3 结果与分析 13

3。1 黑曲霉的培养 13

3。1。1