第二章实验材料与方法 11

2.1实验仪器和试剂 11

2.1.1实验仪器 11

2.1.2实验药品 11

2.1.3实验试剂的配制 11

2.2实验方法 12

2.2.1蚕蛹蛋白的提取 12

2.2.2抑制率计算 12

2.2.3单因素实验 13

2.2.4旋转正交实验 13

2.2.5优化条件下的抑制率检测 13

第三章实验结果与分析 14

3.1酶的选择 14

3.2制备蚕蛹蛋白降胆固醇活性肽的单因素实验 15

3.2.1底物浓度对HMG-CoA还原酶抑制率的影响 15

3.2.2酶浓度对HMG-CoA还原酶抑制率的影响 16

3.2.3酶解温度对HMG-CoA还原酶抑制率的影响 17

3.2.4酶解时间对HMG-CoA还原酶抑制率的影响 17

3.2.5酶解pH对HMG-CoA还原酶抑制率的影响 18

3.3Box-Behnken试验设计 19

3.3.1Box-Behnken分析方案及实验结果 20

3.3.2各因素间的交互作用 21

3.4最佳条件的确定及认证 23

3.4.1制备降胆固醇活性肽最佳条件的确定 23

3.4.2制备蚕蛹蛋白降胆固醇活性肽最优条件的优化与验证 23

结论 24

致谢 25

参考文献 27

第一章绪论

随着社会科技的的迅速发展，我国人民的生活水平日益提高。有些人控制不住欲望暴饮暴食从而导致胆固醇的含量过高而引起的高血脂症。高血脂症主要是指血液中胆固醇含量过高。血中胆固醇过高易引起动脉粥样硬化而诱发冠心病、中风等心脑血管疾病[1]。最先的研究表明，我国的心血管疾病发病率在迅速的提高。而这种现象主要集中的青少年和城市人口中。中国的中年人患心脏病的概率高。中国将迎来心血管疾病高峰。高胆固醇加速前列腺癌的生长速度，导致肾功能衰竭。人们尤其是男性的寿命减少。中风的几率也随高胆固醇增加。过高的胆固醇会阻塞心脏动脉使其变窄从而导致心脏病突发。过多的摄入高胆固醇的食物也会使牙缝间的间隙扩大。因此，高胆固醇在人们生活中的危害越来越大。临床试验表明，降低胆固醇浓度会有效的降低心血管疾病等引起的死亡率。所以，作为有效解决高胆固醇危害的食品、药物等备受人们的关注。作为有效降低降胆固醇功效的肽，降胆固醇活性肽是生物肽的一种。它具有有效降低成本，作用效果良好，实用性极高，安全可靠的优点。因此，降胆固醇活性肽可以有效的添加到人们生活中的保健食品和药品中，展现出了极好的发展前景。现已从猪血、大豆[2]、鹰嘴豆[3]、乳清蛋白[4]、废蚕丝[5]等物质中提取得到有效降低胆固醇浓度的多肽。

蚕蛹作为蚕蛾科家蚕的一种在民间而被熟知。我国有丰富悠久的养蚕历史传统。蚕蛹在民间自古以来就以极高的营养价值作为滋补强身的良好食物。在中国，食用蚕蛹已有很长的历史，中医常将蚕蛹应用于治疗儿童长肌等疾病问题。在亚洲的许多国家，民间也常将蚕蛹作为一种传统食品食用蚕蛹性温而味咸，强精补肾，壮阳的良好效果就被中医认为是极为营养的物质。在我国的《太平御览》古籍有记载:蚕蛹味成辛、性平、无毒，人食可强身健身，入药可医多病，能补气养血、强腰壮肾、滋肺润肠[6]。在现代科学的证明下，蚕蛹具有及其丰富的蛋白质资源。干蚕蛹中大约有60%的质量分数是蛋白质。其中主要为优质的球蛋白，其中丰富的人体所必须的氨基酸蕴含其中。完全符合世界卫生组织所提出的理想蛋白质模式。蚕蛹的蛋白质含量在50%以上，远远高于一般食品，且蛋白质中的必需氨基酸种类齐全，蚕蛹蛋白质由18种氨基酸组成，其中人体必需的8种氨基酸含量很高，8种人体必需的氨基酸营养均衡，比例适当，符合FAO/WHO（联合国粮农组织和世界卫生组织）的要求[7]。蚕蛹也含有钾、纳、铁、铜、锰、锌、磷、硒等微量元素，维生素A、E、B1、B2，胡萝卜素等；蚕蛹中的不饱和脂肪酸的含量非常丰富，约占总脂肪的72.5%另外，干蚕蛹中25%的脂肪（约75%为不饱和脂肪酶，可以对蛹油进行萃取）的不饱和脂肪酸在胆固醇排泄方面有极大的促进作用，也可以有效的抑制内源性胆固醇的合成，降低血脂和血小板的聚集，有极好的软化血管的作用。所以，在慢性肝炎，动脉血管硬化，肝硬化等方面蚕蛹可以有良好的疗效。研究表明，蚕蛹还含有微量元素，多种蛋白激素等其他生物活性物质。所以，如果可以对这些蚕蛹进行有效的利用。既可以有效的减少高胆固醇带来的疾病困扰，也可以极大的丰富提高蚕蛹的加工附加值，获得良好的社会经济效益。本课题将以蚕蛹为原料，从中提取蚕蛹蛋白。并对蚕蛹蛋白进行酶解而得到有效降低胆固醇的活性肽。为蚕蛹资源的充分挖掘，提高闲置的蚕蛹资源的综合利用和产品的附加值，为蚕蛹资源工业化利用提供有效的理论基础。