摘要：收集集胞藻6803的 CO2浓缩机制（CCM）相关的基因组，克隆出可以提高光合作用的基因，选取其中一个作为实验对象（本次研究选取的是集胞藻6803slr1512基因）进行DNA克隆，通过Gateway技术进行植物转化载体的构建。为后续的研究奠定基础。

关键词：集胞藻6806 slr1512基因；克隆；载体构建；Gateway技术；CO2浓缩机制(CCM)

Cloning of 6803 slr1512 gene and construction of plant transformation vector

Abstract: collected set of Synechocystis PCC 6803 CO2 concentrating mechanism (CCM) related to the genome, cloning the genes that can increase the photosynthesis, select one as the experimental object, this study selected set of Synechocystis 6803slr1512 gene) DNA cloning, through Gateway technology in plant transformation vector construction. Lay the foundation for the following research.

Key words: Slr1512 gene; Clone; Vector construction; Gateway technology; CO2 concentration mechanism (CCM)

摘要 1

引 言 1

1. 材料和方法 3

1.1实验材料 3

1.1.1菌株 3

1.1.2质粒载体 3

1.2酶、抗生素、引物 3

1.2.1酶 3

1.2.2抗生素 3

1.2.3引物 3

1.3实验试剂及配方 4

1.4实验用品 5

1.5仪器设备 5

1.6实验方法 6

1.6.1PCR扩增 6

1.6.2基因克隆产物纯化 7

1.6.3植物转化载体的构建(Gateway技术) 7

1.6.4转化感受态大肠杆菌 8

1.6.5挑单克隆 8

1.6.6保菌 8

1.6.7提质粒 8

2. 结果与分析 10

2.1基因克隆结果分析 10

2.2Gateway技术第一步：BP反应 10

2.2.1菌液PCR电泳图结果分析 10

2.2.2提质粒的结果分析 11

2.3.1菌液PCR电泳图结果分析 12

2.3.2提质粒结果分析 13

3. 讨论 14

参考文献 15

致  谢 16

集胞藻6803 slr1512基因的克隆及植物转化载体的构建

引 言

集胞藻6803属于蓝藻门蓝藻纲[1]。集胞藻6803是单细胞蓝藻,以一分为二的方式进行繁殖，繁殖速度快[1]。集胞藻6803之所以作为本次试验对象的最大一个理由是集胞藻的CO2的浓缩机制(CCM)。众所周知，高等植物光合作用中的暗反应即固碳反应可以将CO2固定到有机化合物中，高等植物光合作用中的暗反应所固定的有机化合物是绝大多数生物的能量来源，但在植物光合作用中最有可能通过提高高等植物细胞中的CO2的浓度这种方式来提高植物的光合速率增加植物体内有机物的积累。对集胞藻6803的研究发现，集胞藻6803体内的CO2浓缩机制(CCM)将有希望解决高等植物光合作用的瓶颈问题。解决这一问题正是我们的目的所在。