SLA-DRB1启动子区多态性与PRRSV攻毒试验猪体重的关联研究(2)
PRRSV有多种传播途径。最主要的传播途径包括呼吸道传播与垂直传播（即染病母猪直接在怀孕过程中将病毒传染给幼猪）。 PRRSV感染的主要部位为呼吸道，通过空气中的飞沫与带病毒的气溶胶，即可迅速在一个猪群中大量传播。有研究发现PRRSV在水中可以存活3 ~11天，因此被病猪污染的水源，也会造成PRRSV的大量传播。
PRRSV可以经由各种途径侵袭感染宿主的获得性及先天性的免疫系统，其中包括细胞坏死和细胞凋亡、抑制炎性细胞因子的产生、调节参与抗原递呈分子的表达、减少病毒蛋白在细胞表面的表达以及隐藏中和表位。由此可见，接种抗PRRSV疫苗的效果并不是很乐观。由于蓝耳病毒的高变异性，即使弱毒活疫苗也不能很好地控制其流行，因此通过遗传选育提高猪的抗病性能已成为新的研究热点，而抗性资源和抗性基因的挖掘则是抗蓝耳病猪育种的关键。已经有研究表明不同猪品种之间存在PRRSV抗性的差异，中国地方猪种姜曲海猪抗性显著高于定远猪，但分子机制不明[4]。有研究认为，控制PRRSV除了筛选抗病毒基因外，还可以筛选耐病毒基因。抗病毒与耐病毒的不同之处在于，抗病毒猪机体内的病毒数量是会减少的，而通过病毒数量的减少，猪的各种症状会减轻或消失。而耐病毒猪机体内的病毒数量和病毒的复制过程是没有任何改变的，通过耐受PRRSV而减轻各种症状。Lough et al.(2017)通过对1569只猪PRRSV挑战试验结果进行分析,未发现猪基因多态性与猪耐受PRRSV的明显相关性。作者认为在实验中增加未接种PRRSV的猪的数据可能更容易筛选到猪耐受PRRSV的相关基因多态性[5]。
白细胞抗原DRB1（leukocyte antigen DRB1，LA-DRB1），又名主要组织相容性抗原DRB1（MHC-DRB1），属于MHC II类基因。人HLA-DRB（human leukocyte antigen DRB）第2外显子编码区是抗原递呈中抗原肽的结合区，其近端启动子区域内含有MHC II类基因共有的调控元件如S盒、X 盒、Y盒、CCAAT盒和TATA盒等及相应的转录因子，它们作为一个整体、遵循严格的空间顺序保证基因的正常转录（Lahiru Handunnetthi，2010）[6]。HLA-DRB与抗原递呈中Ia分子相关的不变链（Ia-associated invariant chain，Ii链）、伴侣分子HLA-DM及TCR一起完成抗原的递呈与识别，启动免疫反应。Louis P等（1994）[7]发现X盒中的多态性引起人 HLA-DRB1启动子转录活性发生改变，导致裸淋巴细胞综合症。猪白细胞抗原DRB1（Swine leukocyte antigen DRB1，SLA-DRB1）是HLA-DRB的同源基因。
最近PRRS 宿主遗传学组织（PRRS Host Genetics Consortium PHCG）进行了大规模的PRRSV攻毒实验。大量的实验显示，在猪基因组上有大量的遗传突变与猪对PRRSV的抗性有关。实验还显示，对PRRSV的抗性与猪的体重增加有很强的正相关性（两种不同的PRRSV病毒株相关系数为0.57~0.75）[8]。此实验表明，携带PRRSV抗性SNP的猪在感染PRRSV后体重的增长要比不携带抗性的猪要快。反之亦然，在感染PRRSV后体重增长较快的猪具有PRRSV抗性。因此以体重作为检测指标，可以筛选出带有PRRSV抗性猪。
本研究分析了SLA-DRB1启动子区的基因多态性，将获得的SNPs与PRRSV攻毒试验猪的体重进行了关联性研究，期望能够为抗蓝耳病猪的育种开发候选的分子标记，对猪蓝耳病防治和中国地方猪种的保护和利用产生积极的意义。
1 材料与方法
1．1 试验材料
试验使用的DNA模板来自88只由大白与姜曲海杂交而得的25日龄健康幼猪，通过注射接种PRRSV攻毒。DNA提取步骤已经由实验室其他人员在前期准备中完成，本次实验仅使用现成的模板来进行实验。