噬菌体组合抑制番茄青枯病的效果研究(2)
但这些噬菌体的寄主范围狭窄，只能侵染一部分青枯菌。而青枯菌变异性强，种内具有复杂的遗传多样性，只要细菌受体在噬菌体-细菌结合所需位点发生一个单一变化就能使细菌对噬菌体产生抵抗力，从而丧失疗效。Bhunchoth 等利用从清迈分离到的几株噬菌体用于防控青枯病，发现短尾病毒J2和RSB2组合能有效裂解污染的土壤中的青枯菌[11]。有研究表明同时施用噬菌体混合体系在短期内效果更好，而顺次施用策略在长期过程中具有潜在的优势[12]。本实验利用从不同地区青枯病发病根际土壤中筛选到的4株噬菌体，设置不同的组合处理，室内研究噬菌体多样性抵御青枯菌的入侵能力，病通过盆栽实验加以验证，为开发新型抗青枯病的生防防治提供理论基础。
1 材料与方法
1.1 供试材料
1.1.1 供试菌株
青枯菌：分离自南京市麒麟镇蔬菜大棚发病番茄植株根际，具有强致病力的青枯菌QL-Rs1115[13]，后简称RS，用于本实验；
噬菌体：南京、宁波、南昌、南宁四个省份的土壤样品分别筛选一个噬菌体，编号分别为P3、P21、P34、P42。
1.1.2 供试培养基、营养液和主要试剂
NA培养基：葡萄糖10 g•L-1,蛋白胨 (Tryptone) 5 g•L-1, 牛肉浸膏3 g•L-1, 酵母粉 (Yeast extract) 0.5 g•L-1, pH为 7.0, 105℃灭菌30 min。
半固体NA培养基：液体NA培养基加入1%的琼脂粉；
固体NA培养基：液体NA培养基加入2%的琼脂粉。
青枯菌选择性培养基（M-SMSA）:NA固体培养基冷却至50℃左右，依次加入过滤除菌的1%的氯霉素5 mg、1%的青霉素5 mg、1%的结晶紫5 mg、1%的杆菌肽25 mg、1%的多粘菌素50 mg、1%的放线菌酮50 mg、1%的TTC 50 mg; 抗生素均购自北京鼎国生物技术有限公司。
1.1.3 主要仪器
酶标仪（SpectraMax M5，Molecular Devices，USA）。
1.1.4 供试土壤
温室防效试验中带病土壤采自麒麟镇后村蔬菜种植区番茄青枯病发病田块。
1.1.5 供试番茄
番茄品种为Micro-Tom，具有适于本研究的特征（图1A-D）：i）植株矮小，植株高仅10-20 cm，种植密度高，占用空间小，可在实验室内多层立体放置。同时，Micro-Tom 番茄矮化微型的特征也降低了植株管理所需的人工；ii）生命周期短，利于缩短实验周期，加快实验进程。iii）对光照要求不严，可在普通光照培养箱或组培室中培养