不同光质对蚂蟥生长及相关免疫酶基因表达的研究(2)
1.实验材料与方法
1.1实验材料
1.1.1实验材料 实验所用蚂蟥经郭巧生教授鉴定为蚂蟥Whitmania pigra Whitman，由南京农业大学中药材研究所提供；经郭巧生教授鉴定，实验所用螺蛳（采自南京前湖，野生）为梨形环棱螺Bellamya purificata Heude；实验用水为曝气24h的自来水。
1.1.2主要仪器和设备 电子天平（山海精密仪器厂）；实时荧光定量PCR仪（美国ABI Step one7500）；PCR仪（PTC-200，bio-RAD），电泳仪（DYY-6C，北京优尔一仪器厂）；凝胶成像仪（JS-380，上海培清科技有限公司）；SYBR® Premix Ex Taq™ (Tli RNaseH Plus) (来自：上海皓嘉科技发展有限公司)（荧光定量）；PrimeScript. RT reagent Kit with gDNA Eraser (Perfect Real Time) (来自：上海皓嘉科技发展有限公司)（反转录）。
1.2实验方法
1.2.1实验设计 本实验在室内进行，养殖容器为容积为2L的塑料瓶（瓶底面积为1.33×10-2 m2，实际养殖用水1L，水深12 cm），实验蚂蟥体重为0.028±0.001g。设4个光照条件，分别为红光610±10nm，蓝光450±10 nm，白光full spectrum，自然光，光强范围为60-80μmol•m-2•s-1，分别标记为R、B、W、N组，光照时间为6:00-18:00，3天换水1次，换水量为100%，每个光照处理设置20瓶，每瓶饲养10条蚂蟥。实验时间为60d，期间保持室温为27±1℃。每次每组随机取9条蚂蟥于-80℃保存备用。
1.2.2生长性能的测定 实验开始前测蚂蟥的体重，之后每隔10天测一次蚂蟥的体重，计算出平均质量。
下一篇：西红花组织培养技术研究