百菌清水解脱氯酶（Chd）在枯草芽孢杆菌WB800染色体上整合表达和液态发酵 (2)
2.6 百菌清水解脱氯酶（Chd）在枯草芽孢杆菌WB800染色体上三拷贝整合验证 10
2.7 酶活的测定 10
3 讨论 11
致谢 11
参考文献 11
百菌清水解脱氯酶（Chd）在枯草芽孢杆菌WB800染色体上整合表达和液态发酵
引言：
百菌清可以用来防治如蔬菜的炭疽病和霜霉病、玉米的褐斑病、草莓的白粉病等真菌毒害，是一种杀菌剂，在国内外广泛使用[1]。百菌清对作物的真菌病害具有一定的防治作用，其主要作用机理是其能与真菌细胞中的三磷酸甘油醛脱氢酶发生作用，与该酶中含有半胱氨酸的蛋白质相结合，从而破坏该酶活性，使真菌细胞的新陈代谢受破坏而失去生命力，从而达到预防作物真菌病害的作用[2-4]。
百菌清没有内吸传导作用，但喷到植物体上之后，能在体表上有良好的黏着性，不易被雨水冲刷掉，因此药效期和半衰期较长，导致百菌清在农产品中的残留问题越发突出。百菌清在土壤中药效稳定，不易分解，长期大量施加百菌清会导致严重的土壤污染问题[5-7]。百菌清毒性较强，对兔眼睛和角膜有明显的刺激作用，对少数人的皮肤有刺激作用以及对鱼毒性大。百菌清的广泛使用防治了农作物的病虫害的同时，也使食品安全和环境安全问题越来越突出。
本研究利用本实验室前期分离的降解百菌清的菌株（Pseudomonas sp. CTN-3），将百菌清水解脱氯酶（Chd）基因克隆整合到枯草芽孢杆菌基因工程菌株染色体上，是chd基因在枯草芽孢杆菌上单拷贝和多拷贝表达。并通过液态发酵成功实现chd基因在枯草杆菌WB800中的高效胞外分泌表达。从而可以应用到生产实践当中。
本实验室之前已经解决了chd基因在其自身启动子的带动下不能在枯草芽孢杆菌中表达的问题，但是因质粒易丢失，接下来我们为了使chd基因在枯草芽孢杆菌体内稳定表达和遗传做了一系列的实验。