紫苏醛对黄曲霉和黑曲霉线粒体作用的影响(3)
线粒体中活性氧（ROS）的测定，是利用荧光探针DCFH-DA检验线粒体中ROS，在PCD中，产生信号的ROS来源有两种: 其一，ROS在各种代谢中产生[16]；其二，许多研究者认为超氧化物自由基是在电子链传递过程中产生的。这两种来源的ROS都可能介导PCD，促进PCD机构的激活。
本实验以线粒体为抗真菌作用靶标，研究紫苏醛对黄曲霉和黑曲霉的抗真菌作用，利用荧光探针DCFH-DA检测线粒体中的活性氧（ROS），随着紫苏醛浓度的增加，荧光强度增加，线粒体膜电位（MMP）增加，ROS增加，这些实验结果表明紫苏醛能够有效的抑制黄曲霉和黑曲霉的生长，这个抑制效果与紫苏醛的浓度呈正相关。通过紫苏醛对黄曲霉和黑曲霉线粒体作用的影响，研究紫苏醛可能的抗真菌作用机制，可进一步将其抗菌作用应用到食品，医药，化工等领域。
1 材料与方法
1.1供试材料
1.1.1 原料
紫苏醛：来源于日本东京化成工业株式会社(TCI)
黑曲霉：取自江苏师范大学生命科学学院微生物学实验室。
黄曲霉：取自江苏师范大学生命科学学院微生物学实验室。
1.1.2实验试剂
表1.实验试剂
Table 1 Name of Reagent Tested
试剂名称 化学式 纯度 生产厂家
吐温 80 C64H124O26 化学纯 上海国药
磷酸氢二钠 Na2HPO4•7H2O 分析纯 上海国药
磷酸二氢钠 NaH2PO4•2H2O 分析纯 上海国药
无水葡萄糖 C6H12O6 分析纯 上海国药
琼脂 C12H18O6 实验纯 天津致远
无水乙醇 C2H6OH 分析纯 上海苏懿
氢氧化钾 KOH 分析纯 合肥鑫科
正庚烷 C7H16 分析纯 天津大茂
DMSO （CH3)2SO 分析纯 山东济宁
1.1.3 试剂的制配
（1）0.1% 吐温-80配置：取300 μL吐温80到量筒中，加蒸馏水到300 mL，再倒入干净的瓶子中，超声波震荡，灭菌。
（2）25% 醇钾溶液（提前一天制备）：在锥形瓶里加35 mL水，称取25g的氢氧化钾倒，放热，不加塞，轻摇待其溶解后倒入量筒，用无水乙醇定容到100 mL，再倒入锥形瓶摇匀。