疑似鱼源致病菌的分离纯化与生化特性研究
毕业论文关键词：斑马鱼；分离纯化；革兰氏染色；生化鉴定；人工感染
The separation and purification of a suspected fish source pathogenic bacteria strains and biochemistry studies
Abstract: This topic bacteria isolated from zebrafish skin disease, and purification of one of the strains, temporarily named ZF - 11, gram staining, to determine the bacteria for gram-negative bacteria, biochemical test, further to find the strain of lysine and ornithine negative, amino acid compared to positive, does not produce amino acid decarboxylase, cannot produce gas, glucose, V - P, ONPG reaction is positive, can't use rhamnose xylose, etc. Initially determined with berger bacterial identification manual control, the bacterium bacillus subtilis, artificial infection test, by intraperitoneal injection of 1.3 x 108 cfu/mL infection crucian carp, crucian carp infection was found dead. This study of fish disease prevention and control, safety inspection and quarantine of aquatic products, and reasonable development and utilization of fish skin microbial resources provides a certain reference.
Key words：zebra fish；separation and purification；Gram staining；biochemical identification；Artificial infection；
目录
引言： 5
1 材料与方法 6
1.1试验材料与仪器 6
1.1.1供试材料 6
鲫鱼：徐州某市场购的鲫鱼。 6
斑马鱼，实验室饲养，自行发病。 6
1.1.2实验试剂： 6
1.1.3实验仪器： 6
1.2实验方法 6
1.2.1预实验 6
1.2.2鱼源细菌分离纯化 7
1.2.3革兰氏染色 7
1.2.4 细菌的生理生化试验 7
1.2.5.1供试鲫鱼饲养 7
2 实验结果 8
2.1细菌分离纯化 8
2.2革兰氏染色 8
通过涂片、固定、初染、媒染、脱色、复染等一系列实验步骤对ZF11细菌进行革兰氏染色，在油镜下观察ZF11细菌的颜色和形态。颜色表现为紫色，鉴定ZF11细菌为革兰氏阳性菌。 8
2.3生理生化试验 9
表1.ZF11细菌生理生化实验结果 9
2.4动物感染实验 10
2.5结论 10
本课题从患病斑马鱼皮肤分离细菌，并纯化其中一株，暂命名为ZF11，对其进行革兰氏染色，判定该菌为革兰氏阳性菌，进一步对其进行生化试验，发现该菌株对赖氨酸、鸟氨酸为阴性，氨基酸对照为阳性，不能产生氨基酸脱羧酶，不能利葡萄糖产气，V-P、ONPG反应为阳性，不能利用鼠李糖木糖等。参照伯杰细菌鉴定手册[5]，初步判定该菌为枯草芽孢杆菌。 10
3 讨论 10
引言：
斑马鱼（Barchydanio rerio var）又名蓝条鱼、花条鱼、蓝斑马鱼、印度鱼、印度斑马鱼，鲤科，鱼丹属。斑马鱼和人类基因有着87%的高度同源性，作为模式生物的优势很突出。斑马鱼的个体很小，养殖成本相对较低，且可以大规模养殖。斑马鱼具有多种优点，经过对斑马鱼进行30多年的研究应用和系统发展后，现已有约20个斑马鱼品系。斑马鱼有数以千计的胚胎突变体，是研究胚胎发育分子机制的优良资源，有些斑马鱼还可用作人类疾病模型。关于斑马鱼的研究细胞标记技术、组织移植技术、突变技术、单倍体育种技术、转基因技术、基因活性抑制技术等已经成熟[1] 。作为最受重视的脊椎动物发育生物学模式之一，斑马鱼在其它学科上的利用也显示很大的潜力。吕爱军从斑马鱼肠道中分离纯化出四株菌株，对其进行革兰氏染色实验，细菌为革兰氏阳性菌，其中一株可产生芽孢[2]。杨迟从患病斑马鱼病灶组织分离得到假单孢菌株、嗜水气单胞菌、类志贺邻单胞菌等八种致病菌[3]。