稀土元素镧对淡水涡虫再生中干细胞相关基因的表达影响(2)
2.将DNase I干粉（1500 U）溶解在550μl RNase-Free ddH2O中，轻柔混匀，分装后-20℃贮存。
3.操作前在RL中加入β-巯基乙醇至终浓度1%。同时使用前还要在漂洗液RW中加入无水乙醇，加入量参考说明书。
二、操作过程：
1．匀浆处理：
取10-20 mg组织加300μl裂解液RL，用研磨杵将组织彻底研磨；随后向匀浆液中加入590μl RNase-Free ddH2O和10μl Proteinase K，混匀后56℃处理10-20 min。
2．12,000 rpm(~13,400×g)离心2-5 min，取上清进行以下操作。
3．缓慢加入0.5倍上清体积无水乙醇，混匀，得到的溶液和沉淀一起转入吸附柱CR3中（吸附柱放在收集管中），12,000 rpm(~13,400×g)离心30-60 sec，弃掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。
4．向吸附柱CR3中加入350μl 去蛋白液RW1，12,000 rpm(~13,400×g)离心30-60 sec，弃
废液，将吸附柱放回收集管中。
5．DNase I 工作液的配制：取10μl DNase I 储存液放入新的RNase-Free离心管中，加入70μl RDD溶液，轻柔混匀。
6．向吸附柱CR3中央加入80μl的DNase I 工作液，室温放置15 min。
7．向吸附柱CR3中加入350μl 去蛋白液RW1，12,000 rpm(~13,400×g)离心30-60 sec，弃
废液，将吸附柱放回收集管中。
8．向吸附柱CR3中加入500μl漂洗液RW（已加入乙醇），室温静置2 min，12,000 rpm(~13,400×g)离心30-60 sec，弃废液，将吸附柱CR3放回收集管中。
9．重复步骤8。
10．12,000 rpm(~13,400×g)离心2 min，倒掉废液。将吸附柱CR3置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
11. 将吸附柱CR3转入一个新的RNase-Free离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加30-100μl RNase-Free ddH2O，室温放置2 min，12,000 rpm(~13,400×g) 离心2 min，得到RNA溶液，放于-70℃保存。
1.2.4 RT-PCR
结合研究淡水涡虫干细胞常规基因，利用Primer 5.0 软件设置EF2（内参）、PCNA，HSP90，HSP70四对引物。进行10ml体系PCR，引物及条件见表1。 产物经琼脂糖凝胶电泳，然后通过荧光凝胶成像仪检测结果。
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