高温胁迫对嫁接黄瓜生理生长影响(3)
1. 3. 3 双向电泳 用G-250法测蛋白含量，并用水化液稀释到既定的上样量。利用O'Farrel等人1975年发明的方法，根据蛋白质等电点不同进行第一向等电聚焦(IEF)。根据Laemmli （1970）的方法按分子量的不同用SDS-PAGE分离，把复杂蛋白混合物中的蛋白质在二文平面上分开。
1. 3. 4 染色和图像处理分析 产生的凝胶利用考马斯亮蓝（CBB）R-250染色液染色成可见的蛋白质斑点，将染色后的2-DE凝胶在Image Scanner（GE Healthcare）扫描仪上进行扫描，利用Imagemaster 2D Platinum5.0软件分析图像。比较重复提取的蛋白图谱和双向凝胶，确保蛋白点的可重现性。选择显著差异至少在1.5倍变化的蛋白质点。
1. 3. 5 蛋点质谱鉴定鉴定和数据搜索 从CBB染色的2D凝胶上切取蛋白点，放到经过灭菌处理的离心管中，脱色后清洗，消化过夜。用电喷雾离子阱二级质谱法（LC-ESI-MS/MS）进行分析。在NCBI数据库中为物种进行搜索。
2 结果与分析
2．1 高温胁迫对嫁接黄瓜生长的影响
从表1可以看出，高温胁迫下黄瓜自嫁接幼苗的株高显著低于常温条件下；茎粗表现出显著差异，且低于常温环境，表明高温胁迫对嫁接黄瓜幼苗造成了不同程度的损伤；而高温条件下的叶面积、幼苗干鲜重与常温条件相比没有显著性差异。高温胁迫下，利用苦瓜砧木嫁接黄瓜幼苗与黄瓜自嫁接幼苗相比，株高、叶面积、苗鲜重差异不显著。苦瓜嫁接黄瓜的茎粗高于黄瓜自嫁接，且差异显著；苗干重、壮苗指数也高于黄瓜自嫁接，并表现出显著差异。表明利用苦瓜嫁接黄瓜在一定程度缓解了高温胁迫的伤害。