微管与H2O2在ALA对ABA诱导气孔关闭的抑制作用中的互作(2)
为此，本文用生长 2 周的野生型拟南芥（WT）及 GFP：ɑ-tubulin-6 转基因型幼苗子叶，进行了大量对比试验，研究了微管与 H2O2在 ALA 对 ABA 诱导气孔关闭的抑制作用中的互作。由结果知，ALA 抑制 ABA 诱导气孔关闭的作用与其消耗 H2O2有关，而 H2O2含量的下降又可促使微管的聚合，从而抑制了气孔的关闭。本研究揭示了 ALA调控气孔运动的新机制。1 材料与方法1．1 试验材料生长 2 周的拟南芥野生型（WT，生态型Columbia）及 GFP：ɑ-tubulin-6 转基因型拟南芥幼苗的子叶。1．2 材料的培养1．2．1 MS固体培养基的配置MS 培养基（不含琼脂和蔗糖）配方：KNO3：1900 mg/L、NH4NO3：1650 mg/L、KH2PO4：170 mg/L、MgSO4：370 mg/L、CaCl2：440 mg/L、KI：0.83 mg/L、H3BO3：6.2 mg/L、MnSO4：22.3 mg/L、ZnSO4：8.6 mg/L、Na2MoO4：0.25 mg/L、CuSO4：0.025mg/L、 CoCl2： 0.025 mg/L、 Na2EDTA： 37.3 mg/L、 FeSO4： 27.8 mg/L、 C6H12O6： 100 mg/L、C2H5NO2：2 mg/L、C12H17N4OS+：0.1 mg/L、C8H10NO5P：0.5 mg/L、HNO3：0.5 mg/L与 8 g/L 琼脂和 30 g/L 蔗糖，蒸馏水中溶解，用 NaOH 调节 PH值，并用 PH试纸测量，直至其达到至 5.8-6 之间，置于灭菌锅中灭菌 20 min，温度设定为 121℃，最后铺板于无菌玻璃培养皿，待用。
1．2．2 种子灭菌将种子放于 4℃ 冰箱春化 3-4 天，然后用 75% 乙醇上下颠倒洗涤45 s，去除乙醇，并用无菌水洗涤 3 次，再用 10% NaClO 上下颠倒洗涤十分钟，去除 NaClO，无菌水洗濯 5 次，随后播种于培养基中温室培养。
1．2．3 MES-KCl缓冲溶液配制在 10 mmol/L 的 MES （2-N-吗啡啉-乙磺酸） 中加入 50 mmol/L KCl 再加 0.1 mmol/L的 CaCl2，并用 Tris 调节 PH值至 6.15。1．2．4 负载溶液配制将 10 mmol/L Tris 与 50 mmol/L KCl 溶液混合。若配 1 L 溶液需要 Tris：1.2114 g，KCl：3.725 g；若配 500 mL 溶液需要 Tris：0.6057g，KCl：1.8625 g。用浓 HCl调节 PH至 7.2。