小麦白粉病菌寄主分析(2)
目前国内外有大量的关于小麦白粉菌的研究报告，对其种属、形态、感抗性以及遗传特性等方面都做了大量的研究工作[8-14]。并且有研究发现禾本科的高羊茅对小麦白粉菌表现为感病，可能是小麦白粉菌的寄主植物[15]。本实验旨在寻找小麦白粉病菌的寄主，以研究该病菌在不同寄主间的生长情况、生长周期以及其形态学的变化，从而进一步研究其感病机理，并从中分离感病基因，后续研究可通过基因沉默的方法获得小麦白粉病的新品种，为小麦抗病育种提供新的基因资源。
1材料与方法
1.1材料
1.1.1供试病菌
小麦白粉病菌（Blumeria graminis f. sf. tritici, Bgt）为周口农科院试验田中分离的小种。
1.1.2供试植物
茄科植物、禾本科植物、豆科植物和十字花科植物等19种不同科属植物。
1.2方法
1.2.1使用仪器
电子天平（HZT-A1000型）购自福州华志科学仪器有限公司；电热恒温水槽购自上海精宏实验设备有限公司，奥利巴斯（BX41）一般用正立显微镜。
1.2.2试剂及配置
二氨基联苯胺（Diaminobenzidine, DAB）；台盼蓝；冰乙酸（分析纯）购自天津风船化学试剂有限公司；无水乙醇（分析纯）购自国药集团化学试剂有限公司；NaCl(分析纯）购自国药集团化学试剂有限公司。
1mg/mL 的DAB液、（pH值3.8，4℃条件下避光保存）；固定液（无水乙醇：冰乙酸=3:1）；0.3%台盼蓝（0.9%的NaCl溶液作为溶剂）。
1.3实验步骤
1.3.1供试植物的栽培
取19种供试植物每种植物的种子若干粒进行播种，于恒温光照培养箱（22±2℃）中进行培养，待双子叶植物生长出两片真叶，单子叶植物生长到五叶期时即可对供试植物进行小麦白粉菌的侵染实验。同时小麦白粉菌培养在感病小麦材料上。
1.3.2供试植物叶片的处理
（1）接种
将新鲜的小麦白粉菌轻柔的涂抹于刚长出供试植物叶片上并做好标记。
（2）取样
分别于接种后的1d、3d、5d、7d进行取样。将取样后的植物叶片的叶柄用剪刀剪成斜面并朝下放入10mL的EP管内。
（3）DAB染色
用移液枪吸取配制好的DAB液（1mg/ml）适量加入已放入植物叶片的EP管中，将EP管置于光照下4～8h。
（4）固定液脱色
DAB染色后，将EP管内剩余的DAB液倾于废液桶中，向EP管中加入固定液使完全没过植物叶片。置于黑暗条件下静置过夜处理。（若植物叶片较厚，脱色不完全时，可以进行二次脱色。）
（5）台盼蓝染色
待脱色完全后，将EP管内的固定液倾入废液桶，向EP管内加入配制好的0.3%台盼蓝染液使其完全没过植物叶片。70℃水浴加热15min。之后倒掉台盼蓝染液，并用蒸馏水将植物叶片上残留的染液清洗干净。
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