玉蝴蝶有效成分的提取及其抗菌功效评价(4)
(3) 玉蝴蝶60%丙酮提取物的制备
将玉蝴蝶放置在温度为60℃的烘箱内烘干，然后使用粉碎机将玉蝴蝶磨成粉末状，使用天平准确称量玉蝴蝶粉末20g，使用19倍量60%丙酮浸提3次，浸提的时间间隔分别为48h、24h、24h，将三次的浸提产物合并在一起，使用3层纱布过滤产物得到滤液。将滤液置于3000 r/min的离心机中离心30min，使用上层清液。再使用旋转蒸发仪将60%丙醇除去，将除去的丙醇收好，备用。用60%丙酮20ml冲洗收集。用60%丙酮定容至20ml， 高压灭菌(115℃，15min)，密封保存。
(4) 玉蝴蝶乙醇分级提取物的制备
用天平称取玉蝴蝶粉末20g，分别将粉末加入均为200 ml的 95 %、70 %、45 %乙醇溶液中浸泡，条件为在密闭的空间中，水平放置在室温的环境下，静置间隔时间为48h、24h、24 h，静置结束后收集3次静置液，使用3层纱布过滤，将滤液放置在转速为3000 r/min的离心机中离心30 min，使用上层清液，将清液放入旋转蒸发仪中除去乙醇。乙醇基本回收完全时，用相应95%、70%、45%的乙醇溶液洗涤，收集于容量瓶中，用相应乙醇溶液定容至20ml，高压灭菌(115℃，15min)，密封保存。
1.3 课题研究的目的和意义
玉蝴蝶作为一传统中草药，化学成分复杂，生物活性广泛。药理和毒理学试验表明，玉蝴蝶具有抗炎、抗菌、细胞毒性、抗癌等作用。
已有研究[23]发现玉蝴蝶植物的树皮及根的二氯甲烷提取物具有抗菌活性，其主要抗菌有效成分为帕拉醇、β-拉帕醌和玉蝴蝶素A，这些活性成分对枯草杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、烟曲霉、黄曲霉等多种细菌和真菌都有活性抑制作用。
通过对玉蝴蝶树皮以及根中抗菌活性成分抗菌效果的研究，来确定是否能将玉蝴蝶的抗菌活性成分加入到化妆品中达到更为天然的抑菌作用，其中最主要的两类菌种就是金黄色葡萄球菌以及大肠杆菌和绿脓杆菌。根据化妆品微生物学质量规定：每克或每毫升的产品中不得检查出上述三类菌种。化妆品中霉菌和酵母菌总数不得大于100CFu/ml或100CFu/g，成人化妆品的细菌总数不得大于1000CFu/ml或1000CFu/g[24]。
本课题的实验在玉蝴蝶的有效成分提取上采用了超声提取法。超声波提取法相比其他提取方法有比较好的提取效果，并且仪器使用简单而广受欢迎。根据文献查得95%的乙醇作为溶剂提取效果最好[25]，在溶剂一定的情况下选择了物料比，温度，时间这三个因素进行优化实验，选出最优产量的条件。在经过95%的乙醇提取之后再进行旋蒸去除酒精后放入40℃的烘箱烘干，得到产物。称量后放入冰箱保存。接着要检验提取物的抑菌效果，所选菌种是大肠杆菌，调配含有不同浓度玉蝴蝶提取物的液体培养基，将大肠杆菌菌落放入试管中，放入37℃的培养箱中培养12h再观察菌落生长情况，来判断玉蝴蝶提取物的抑菌的功效性。并且将提取物添加入常用膏霜进行耐热耐寒稳定性的检测，以验证其是否适合于添加入化妆品中。
2. 实验原理与方法
2.1 实验原料与仪器设备
2.1.1 实验原料
本次实验所用到的原料有：玉蝴蝶提取物、硬脂醇聚氧乙烯醚-2、硬脂醇聚氧乙烯醚-21、单硬脂酸甘油酯、十优尔-十八醇、二甲基硅油、棕榈酸异丙脂、辛基/癸基三甘油脂、白油、甘油、EDTA.Na2、Carbopol 941、去离子水、氢氧化钠、牛肉膏、蛋白胨、氯化钠等。