鸡Gga-miRNA调控激活鸡树突状细胞的免疫功能的研究(2)
病毒和宿主在感染与防御方面是一个不断较量、不断进化的过程；禽流感病毒的致病性一方面取决于病毒的特征，另一方面取决于宿主免疫应答。树突状细胞是免疫应答过程中最重要的抗原递呈细胞，也是沟通天然免疫和获得性免疫的唯一桥梁[6]，并且参与抵御流感病毒的复制。树突状细胞对禽流感病毒的应答和递呈直接决定了禽流感病毒是逃逸还是被清除。
非编码RNA 是一类具有调节功能的RNA，它们广泛参与调控树突状细胞的发育、成熟以及抗原递呈功能等[7]。宿主非编码RNA调控天然免疫的激活：非编码RNA包括rRNA，tRNA，snRNA，snoRNA 和microRNA 等已知功能的 RNA，还包括未知功能的RNA。其中，miRNA是一种长度约22nt的具有调控功能的内源性非编码RNA，具有高度保守性、表达时序性和组织特异性等特点，参与多种免疫细胞发育和免疫应答[8]。
上述研究结果表明miRNA可以调控树突状细胞的抗原递呈能力和细胞因子分分泌，那么miRNA是如何调控鸡树突状细胞抵抗H9N2亚型禽流感病毒复制的需要进行研究。
机体抗病毒感染的天然免疫主要有两条信号通路：一条是通过 TLRs受体识别进入细胞体内的病毒；另一条则是通过RNA解旋酶RLR受体识别细胞质内病毒的双链RNA分子。
本课题拟从鸡树突状细胞和H9N2禽流感病毒为对象，从非编码RNA这一调节性RNA的层面去深入探讨鸡树突状细胞抑制禽流感病毒复制的分子机制，为合理的开发新型非编码RNA预防禽流感病毒提供了重要的理论依据。
1.材料与方法
1.1实验材料
1.1.1 试剂及耗材
质粒pSilencer4.1（图1）；含有荧光素的质粒pMIR-report（由本实验室提供，图2）；低致病性禽流感病毒 H9N2 毒株(由南京天邦惠赠)；引物由上海生工生物技术有限公司合成；TaqDNA聚合酶、10×PCR mix、高保真酶、HindIII限制性内切酶、SacⅠ限制性内切酶、BamH1限制性内切酶（由Thermo公司提供）；DNA琼脂糖凝胶回收试剂盒，高纯度质粒小提中量试剂盒（由OMEGA公司提供）；DH5α-感受态细胞。