碱胁迫对玉米叶片膜脂过氧化的研究(2)
高强度的盐碱胁迫使得植物质膜的通透性加强，增加膜脂过氧化速度，造成膜系统的破裂。碱胁迫对植物另一个重要的伤害是膜脂的过氧化作用。其最主要的产物之一是丙二醛（MDA）[8]，检测MDA可确定膜脂过氧化水平、膜系统受损水平以及植物的抗性。而SOD、POD、CAT的活性高低是掌控伤害的最重要因素[9]。植物体内这些酶的活性较高、广泛存在，在植物生长发育过程中，酶活性一直改变，因此测定其活性可以说明一段时间内植物体内代谢的变化，然后观测碱胁迫对植物代谢的影响[10]。
目前有关胁迫对植物质膜的伤害作用的研究很多[16-28]。但对于玉米叶片在碱胁迫下的形态、生理指标变化，还未做出综合性的研究报告。因此，本实验旨在通过对玉米在不同浓度碱胁迫下的幼苗叶片的形态指标和生理指标进行检测[11]，对碱胁迫中玉米叶片抗氧化系统的研究做一综述。以期对提高玉米抗碱性提供参考帮助[12],也为今后对盐碱地的开发利用[2]以及农业发展提供理论依据。
1材料与方法
1.1试验材料与处理
1.1.1供试材料
普通品种的杂交玉米种子
1.1.2试剂
100mmol/L pH为6.0磷酸缓冲液、0.2mol/L pH为7.8磷酸缓冲液、完全培养液、NaHCO 3溶液（完全培养液配制）、乙醇、三氯乙酸（TCA）、硫代巴比妥酸（TBA）溶液、NBT、核黄素、愈创木酚、H2O2
1.1.3设备
量筒；烧杯；试管；移液管；烘箱；恒温水浴锅；刻度滴管；刻度吸管；研钵；滤纸；漏斗；玻棒；电子分析天平；微量移液器；电导仪；紫外分光光度计；手术刀片；剪刀；普通冰箱（-20℃，海尔）；容量瓶；台式冷冻离心机；高速离心机；光照培养箱；生化培养箱（LRH-250-A）
1.2试验设计
种子萌发处理：选取颗粒饱满、完整的玉米种子，用蒸馏水浸泡，置于白磁盘中，铺上湿润纱布，在25℃恒温生化培养箱中培养待其发芽[13]。72小时后，选取生长状况良好且发芽一致的玉米种子[14,15],均匀种植在含有充足完全培养液的透明水杯中，每杯种植的大豆种子为10颗。
在室温及自然光照条件下生长至三叶一心期时，以NaHCO3为碱胁迫剂，用完全培养液配置成50 mmol/L 、100 mmol/L 、150 mmol/L 、200 mmol/L [10,24,26,31]的不同浓度的NaHCO3溶液进行碱胁迫处理，并以不加NaHCO3的完全培养液为对照[20]。每组实验组和对照组的种植杯数均为10杯。胁迫处理后，每隔48h选取玉米幼苗的倒二叶测定各项生理生化指标。
1.3实验方法
1.3.1超氧化物歧化酶（SOD）活性的测定
选用氮蓝四唑（NBT）光化还原法测定 [5] 。
以抑制NBT光还原的50%为1个酶活性单位表示SOD活性单位。
1.3.2丙二醛（MDA）含量的测定
采用邹琦的TBA法[13]。
1.3.3过氧化物酶（POD）活性的测定
选用愈创木酚法[14]。过氧化物酶催化使愈创木酚被H2O2氧化成茶褐色的4-邻甲基苯酚。其在470 nm处有最大吸收峰，因此可以检测过氧化物酶的活性。
过氧化物酶活性单位（U）以每分钟A470变化0.01表示。
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