中药三叶青(Tetrastigma hemsleyanum Diels et Gilg)为葡萄科(Vitaceae)植物,又名三叶对、蛇附子、三叶扁藤、金丝吊葫芦、破石珠、丝线吊金钟、雷胆子等,是我国特有的植物[10]。广泛分布于长江以南各省份,主要有浙江、湖南、海南、福建等地区,常生长在山坡林下的灌丛中或者是山谷溪边林下的岩石缝中。其块根或是全草都可入药,具有清热解毒、祛风化痰、活血止痛的功效。其内服可治疗小儿高热惊厥、痢疾、支气管炎、肺炎、咽喉炎、肝炎及病毒性脑膜炎;外敷可治疗毒蛇咬伤、扁桃体炎、蜂窝织炎、跌打损伤等[11]。黄酮类化合物是三叶青的重要药用成分,它能抑制癌细胞生长,诱导癌细胞凋亡`优尔|文\论*文-网www.youerw.com,具良好的抗肿瘤作用,且无毒副作用[12]。在自然条件下三叶青的球形块根生长相对较缓慢,有关三叶青离体快繁的研究被广泛开展,但从基因方面探讨三叶青块根生长发育的机理却很少。
本研究即利用基因同源性的原理,克隆三叶青的2个肌动蛋白基因,并对其进行生物信息学和基因的表达分析,检验该基因在不同组织中的表达情况,研究结果报道如下。
1 材料与方法
1.1 材料
三叶青采自丽水市庆元县山区野生种,种植于杭州师范大学塑料大棚中。三叶青的新鲜块根,用自来水冲洗干净后用75%的酒精浸泡30sec,浸泡结束后用滤纸吸干多余的水份,称取50 mg的块根置于研钵中,加入液氮充分研磨。在液氮挥发之前将研磨样品转移至1.5 mL的RNase-free离心管中。另外, 为了分析该基因片段在不同组织中的表达情况, 还采集了叶片、茎和普通根,对其的处理方法同对块根的处理方法。