近年来,一些调查研究显示中国国内大豆需求是旺盛的,1995年—2012年数据显示大豆进口量从292万吨增加到624万吨,年均增长19.74%,中国大豆市场呈现供需不平衡的现象[4]。从国家粮食安全战略视角出发,研究大豆耐盐生长的适应性,充分利用有限的耕地资源。提高大豆作物产量,改善甚至逆转大豆产业进口大于出口的局面,大豆耐盐育种研究迫在眉睫[5]。大豆生产每年都受到不同程度的盐胁迫的危害,若能利用基因工程技术对大豆品种进行遗传改良,培育耐盐大豆品种,在沿海滩涂上进行种植,不仅可提高我国大豆总产量,同时也为合理利用、开发沿海滩涂地,改良盐碱土壤作出巨大贡献。因此,进一步探究大豆耐盐机理显得尤为重要。
盐胁迫下,植物体内主要生理过程都会受到影响[6],例如光和作用、蛋白质合成、能量和油脂代谢等。总体来说,盐胁迫对植物的破坏作用主要是通过渗透胁迫、离子毒害、营养失衡以及盐胁迫引起的次级反应如氧化胁迫等过程来实现[7]。植物抗氧化系统在植物抵御盐胁迫中也有重要作用[8]。盐胁迫下,大豆幼苗POD和SOD活性随着盐浓度的增加有逐渐上升的趋势[9],大麦中耐盐的大麦品种根系会比盐敏感品种在盐胁迫下有更多活性蛋白的清除,水稻中,耐盐性强的品种也会比盐敏感品种表达更多的抗坏血酸过氧化物[10]。有研究发现抗逆性强的品种具有更强的渗透调节能力和离子去除能力[11],增强了逆境下植物的生存和恢复能力。
盐胁迫下,对表型分析和生理指标测定可以初步鉴定大豆的耐盐性。大豆耐盐性生理指标主要有盐胁迫下可溶性糖含量、过氧化物酶(POD)活性、丙二醛(MDA)含量等[12]。本次试验研究拟利用土培盐处理的方式,观察分析大豆盐敏感大豆品种幼苗的生长情况,同时测定在盐胁迫下施用根瘤菌肥前后大豆盐敏感品种大豆幼苗叶片、根系和茎当中可溶性糖含量、Na+及K+离子含量、MDA的含量、过氧化物酶含量和ABTS·+活性。
1.材料与方法
1.1材料
试验材料为Union85140盐敏感大豆,由中国农科院作物科学研究所邱丽娟研究员惠赠。
1.2试验方法
1.2.1大豆种子处理及种植、大豆苗期处理和大豆样品采收
选取大小一致且无病虫害、颗粒饱满的大豆种子,对大豆种子进行消毒,温水泡30 min,倾倒出温水,用镊子将种子取出,放置在已经灭菌的滤纸上吸干种子表面水分,取平皿放入灭过菌的滤纸,用移液枪吸取1500 µl的蒸馏水润湿滤纸,是为了在春化和暗培养过程中为种子提供充足的水分。将种子点进平皿中,大约每盘放置6颗,用封口膜封住后放入4 oC冰箱进行春化,春化时间为48 h。春化后转入30 oC培养箱进行培养至大豆萌发,一般大豆萌发为2两天。一部分种子移植到缺氮Fah培养基于10 cm×10 cm 方板平板培养基上,每板6棵,5天后,接种中华根瘤菌,2天后,转移到含NaCl缺氮Fah培养基10 cm×10 cm 方板平板培养基上,每板6棵,处理48小时。每个样品3个平板,其中1个在不含NaCl缺氮Fah培养基平板培养基上,2个盐处理。本次试验对同一作物盐敏感大豆品种的根、茎、叶进行理化指标测定及分析,一共1个品种,1个对照,5个平行,采用三种浓度NaCl溶液:0 mM,100 mM,200 mM,300 mM,一个不进行盐胁迫,对大豆萌发期幼苗进行盐胁迫处理, 比较盐胁迫环境下盐敏感大豆品种接种中华根瘤菌前后的变化并对其各项生理生化指标进行分析。
1)样品前处理:分别称取大豆根、茎、叶的鲜重(FM)并记录,于液氮中保脆后移入-80 OC冰箱中保存。