1.1.2 培养基的筛选与优化
培养基是用于细胞或组织培养的基质,相当于组织培养物生长发育的“土壤”。培养基的主要成分一般包括碳源、氮源、无机盐、有机物、植物生长调节剂等。培养基的种类、激素成分和组合对树番茄叶片的分化至关重要。对植物组织培养而言,一旦外植体确定,影响其再生效果的最关键因素就是培养基(激素的种类及浓度)和培养条件,不同植物种类或不同品种对激素的要求不同。根据有关树番茄的组织培养报道,一般采用MS培养基。MS培养基是Murashige和Skoog在进行烟草组织培养实验时设计的,其特点是无机盐类浓度较高,尤其是铵盐和硝酸盐的含量高,能够满足快速增长的组织对营养元素的要求。配置培养基过程中,培养基的pH应控制在5.8,因为pH对琼脂的凝固有一定影响。当pH高于6时,培养基易变硬,妨碍培养物生长;反之,pH低于5时,琼脂凝固性变差。1/2MS是MS培养基的大量元素分别减少至原来的1/2构成的。生根培养基的实验分为8组,第一组是1/2MS+蔗糖+6-BA2mg/L+NAA0.01mg/L;第二组是1/2MS+蔗糖+6-BA2mg/L+NAA0.05mg/L;第三组是1/2MS+蔗糖+6-BA1mg/L+NAA0.01mg/L;第四组是1/2MS+蔗糖+6-BA1mg/L+NAA0.05mg/L;第五组是1/2MS+蔗糖+KT2mg/L+NAA0.01mg/L;第六组是1/2MS+蔗糖+KT2mg/L+NAA0.05mg/L;第七组是1/2MS+蔗糖+KT1mg/L+NAA0.01mg/L;第八组1/2MS+蔗糖+KT1mg/L+NAA0.05mg/L。通过八组实验的数据分析,可以得到最适合树番茄叶片分化的培养基。[5]
1.1.3 实验室无菌基本操作技术介绍
植物组织培养实验室,一般包括准备室、无菌操作室、培养室等,不同实验室配备相应的仪器设备。准备室主要用于器皿的清洗、干燥及保存,培养基的配制及灭菌。无菌操作室在整个组织培养过程中,有着举足轻重的地位,用于植物材料的消毒、外植体的接种、培养材料的转移等无菌操作。无菌操作室要求密闭,空气流通通过空调进行,每天用紫外杀菌灯进行杀菌。培养室是提供培养材料生长发育的场所,设有培养架、加湿器、光照定时器等。室内温度一般控制在26±1℃。
超净工作台是植物组织培养中最常用的无菌操作装置,用于外植体的接种。它的工作原理是通过过滤层将灰尘、细菌等被吸附隔离。无菌空气吹过超净台台面,形成风幕,使台内达无菌状态。操作前需打开紫外灯照射灭菌30分钟以上,并用酒精消毒双手。高压灭菌锅用于进行培养基、橡胶塑料制品等的灭菌。培养基灭菌一般121℃、15-20min。干燥烘箱用于玻璃器皿的干热灭菌。
1.1.4 植物离体快速繁殖
植物离体快速繁殖是指利用植物组织培养技术,将植物的外值体进行离体培养,在短时间内获得大量遗传性一致个体的方法。其过程包括建立无菌培养,芽的继代增殖培养,壮苗与生根等。植物离体快速繁殖可应用在种植资源的保存、名贵资源的保存、珍稀资源的保存、脱毒苗、杂合的新品种繁殖等领域。
1.2 树番茄的研究
树番茄——生长在树上的番茄,木本植物,又名洋酸茄、木本番茄等。茄科多年生常绿灌木.是一种集观花、观果、食用于一体的植物。
1.2.1 树番茄的形态特征及生长习性
树番茄是常绿灌木,高2.5-3m,为无限生长型。树干灰白色,枝叶绿色,枝干中空,木质较疏松。叶互生,有短柔毛,心形;嫩叶紫红色、老叶浓绿色,先端渐尖,全缘;叶片长25—35cm、宽15—20cm。花腋生,聚伞花序,每个花序开花8~12朵,坐果3~9个,或成串;花冠粉白色、喇叭形,比花萼长2倍。果实卵圆形,果肩无裂纹,幼果绿色,半成熟时紫红色,成熟后为橙黄色,色泽艳丽;单果重35~55g,长6cm,肉厚,皮薄、平滑具韧性。树番茄极耐,源^自(优尔:文,论)文]网[www.youerw.com贮存,其鲜果在室温下可贮存80~120d.且可保持诱人的色泽和鲜美的道不变,适于长途运输和反季节销售[6]。