1.1实验材料与处理

1.1.1实验材料

实验材料选择的是黄淮海地区大面积种植的大豆品种翼黄13号,选择那些大小相似,颗粒饱满且无病害的大豆种子,将其在四月份播种,包裹在浸润脱脂棉纱中萌发,另准备32只一次性杯子,每两个叠套在一起,其中里面的杯子杯底设置两个小孔(便于换水),32h后,种子播种于每组放有适量均等的石英砂的杯子中(每组杯子中4颗种子)。

1.1.2 材料处理   

温室培养,给予正常的光照与水分,待每棵大豆幼苗长齐四片新叶,对大豆幼苗分别进行30℃、35℃、40℃的高温胁迫,处理过程中应要相应地控制好人工气候箱的环境条件,一方面将光照强度控制在适当的范围内,另一方面空气湿度相应地控制在75%左右,并且按光照处理8 h和黑暗处理16 h,另外,在胁迫过程中为了避免水分缺失给大豆幼苗带来不必要的干扰,记住每天要按时浇水,要保持受高温胁迫的幼苗在水分充足地条件下生长。以室温25℃为空白对照,在第0d、3d、6d、9d分别可测定可溶性糖、可溶性蛋白、丙二醛和游离脯氨酸的含量。

1.2 实验仪器设备   

试管  烧杯  容量瓶  移液管  胶头滴管  玻璃棒  棕色瓶  称量天平  研钵  水浴锅  冰箱  高速离心机  紫外分光光度计  人工气候箱

1.3 生理指标检测

检测大豆叶片可溶性蛋白质含量用考马斯亮蓝G-250染色法[9] 方法进行测定:首先称取0.25~0.5g的大豆幼苗叶片,用5mL蒸馏水或者缓冲液加入适量的石英砂用研钵研磨成匀浆,用3000r/min离心机离心10min,取上清液备用。然后吸取样品提取液0.3mL(视为蛋白质含量的适当稀释),源!自`优尔'文"论(文`网[www.youerw.com注意不要吸入叶片残渣,轻轻放入试管中(每个样品要重复两次),加入5mL的考马斯亮蓝试剂,摇匀,放置2min,注意吸光光度计需要预热20min,最后利用吸光光度计在595nm下比色,按正确的操作步骤,测定并记录下相应的吸光度值,并通过查得标准曲线测的值得到蛋白质的含量。本次实验样品中蛋白质的含量(mg/g)=查得的蛋白质(µg/g)×提取液总体积(ml)/样品重(g)×测定时加样量(ml)×1000进行计算,以蛋白标准溶液的浓度为横坐标,以吸光度为纵坐标,绘制标准曲线;利用蒽酮法比色法[9]测定大豆叶片中的可溶性糖;利用硫代巴比妥酸法[9] 测量其丙二醛的含量;利用磺基水杨酸提取茚三酮显色法[9] 对脯氨酸的含量进行测量。

1.4 实验数据与分析

可以利用Excel软件对本次实验测得的结果进行处理,并依据所测得的平均值来绘制相关的图表,最后进行数据分析总结。

2 实验结论

2.1 高温胁迫对大豆幼苗叶片中可溶性糖含量的影响

可溶性糖(SS)是植物对抗逆境的一种有效的渗透调节保护剂。由表一分析可知,随着温度的升高,大豆幼苗叶片的可溶性糖含量显著增加,且在对大豆幼苗进行40℃高温处理时,可溶性糖含量明显高于其它温度的热害处理,并随着胁迫时间的延长持续增加。对大豆幼苗叶片进行30℃高温胁迫时,随着胁迫时间的延长,可溶性糖含量的增加较缓慢,上升的幅度并不大;40℃高温处理时,大豆幼苗叶片可溶性糖含量从第3d后增加接近线性变化。热害处理第9d时,32℃、36℃、40℃胁迫下的可溶性糖含量分别是第0d含量的3.70、6.71、7.98倍。这一结果与涂三思、秦天才就高温胁迫对黄姜叶片可溶性糖含量的影响的研究结果相似[10]。

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