本论文研究不同钡离子浓度对鲫鱼鳃一氧化氮合酶（NOS）活性的影响，在实验中，将鲫鱼暴露于0 mmol/L、0.1 mmol/L、1.0 mmol/L、2.0 mmol/L四种浓度的钡溶液曝气水中，创建鲫鱼的钡鳃损伤模型。观察四天内鲫鱼往返次数情况，

在不投掷食物96 h后，处死鲫鱼并剥离鳃组织，测定鳃一氧化氮合酶（NOS）活性。分析一氧化氮合酶（NOS）活性变化情况，揭露钡对鲫鱼鳃损伤机制。

观察鲫鱼的行为和鳃中一氧化氮合酶（NOS）活性的变化, 目的在于研究碱土金属钡离子对鲫鱼鳃损伤机制,对保证鱼类的健康养殖与防治环境污染具有至关重要的意义。

2 材料与处理

2.1 供试材料

2.1.1实验动物

人工养殖鲫鱼。从徐州文沃市场购买20条大小相近、健康活泼、表皮完好的鲫鱼，分别置于四个水箱中，放置氧气泵，饲养在实验室环境下3天。

2.1.2实验试剂

一氧化氮合酶（NOS)测定试剂盒（由南京建成生物工程研究所制备）、生理盐水（0.9%）、双蒸水。

     测定试剂盒的组成以及制备（100T/48样）：

表2-1 一氧化氮合酶（NOS)测定测试盒的组成与配制

Table 2-1 The Composition and Preparation of Nitric oxide synthase (NOS) Text Kit

试剂编号 剂量 注意事项

一号试剂 缓冲液：6 ml （4瓶） 

在-20 ℃以下避光的环境下冷冻保存3个月。化冻摇匀才能使用。

二号试剂 促进剂：白色或淡黄色粉剂（6支）

稀释液：0.6 ml （6支） 冷冻保存在-20 ℃以下的温度下，保存6个月。使用后可将剩下的试剂放入-20 ℃以下温度下冷冻保存，但是时间不得超过一周。

三号试剂 显色剂：6 ml液体（2瓶） 在4 ℃避光环境下保存3个月。

四号试剂 透明剂：6 ml（2瓶） 室温下保存6个月。天气寒冷后会出现凝固现象，可进行37 ℃水浴使之变澄清时再使用。

五号试剂 终止剂：60 ml（2瓶） 4 ℃温度条件下保存6个月。实验室温度低时，会出现浑浊，可进行37 ℃水浴使之变透明时再使用。

六号试剂 液体10 ml（1瓶） 4 ℃温度条件下保存6个月。临用前如观察到在瓶壁或瓶底有结晶，应采取措施至其完全溶解后，才可使用。

2.1.3实验设备 

  手动组织匀浆器、一台TGL-16B高速枱式离心机、一台DK-SI4电热恒温水浴锅、赛多利斯电子天平、配1 cm光径比色杯的分光光度计、1个1000 ul的Eppendorf移液枪、1个100 ul的Eppendorf移液枪、1个10 ul的Eppendorf移液枪，并且若干对应3种型号对应的枪头、1.5 mlEP管22个。             

2.2 实验预处理

2.2.1样本要做的预处理

    投毒与观察：将所买鲫鱼称重并每组分5条，放于充足曝气2天的水箱中，分别投放不同浓度的氯化钡溶液中，将鲫鱼预饲养4天，并在实验室条件下观察4天。4个水箱投放氯化钡情况如下：

    第一组：为对照组，正常饲养；

    第二组：为实验组，在0.1  mmol/L Ba浓度环境下饲养；

    第三组：为实验组，在1.0  mmol/L Ba浓度环境下饲养；

    第四组：为实验组，在2.0  mmol/L Ba浓度环境下饲养。