食性结构驱动的两种国产眼镜蛇蛇毒蛋白组含量的变异(2)
1.1 动物采集投饲与蛇毒提取 5
1.2 蛇毒高效液相分离与SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分离 6
1.3 蛋白条带质谱鉴定及相对含量计算 6
1.4 统计分析 7
2 结果与分析 7
2.1食性结构对眼镜蛇排毒量特征的影响 7
2.2 食性结构对眼镜蛇蛇毒中各蛋白组分相对含量的影响 8
3 讨论 14
3.1 研究意义 14
3.2不同食物对眼镜蛇蛇毒的影响 14
参考文献： 15
致谢 16
引言
世界上，大多数为人类熟知的真蛇类（advanced snake）都是有毒的，分别属于眼镜蛇科、蝰科和游蛇科。古今中外，蛇伤事件（尤其是毒蛇咬伤）经常发生在人类生活的区域，而且毒蛇咬伤会对人类的身体机能和人体健康状态产生非常重大的影响，这是因为蛇毒毒素的作用，人类的血液和神经系统将会遭受到巨大的伤害，从而影响人体的神经调节和内分泌调节。从蛇毒成分进行鉴定后，我们发现其实蛇毒是一种非常复杂的混合物，它是由大量的特异性酶类和不具酶活性的蛋白质、多肽组成[1]。随着人类的逐渐深入的研究，有关蛇毒的神秘面纱逐渐被揭开。蛇毒的组成多样性中包含着生物进化的信息，并且具有较大的潜在分类价值[2-3]。基于蛇毒的组成及其功能多样性，人类开始着手于蛇伤诊疗、完善抗血清制备的策略以及开发和利用天然活性药物[4]。现阶段，人类针对蛇毒进行了一系列的研究，这有助于我们进一步了解蛇毒毒素多种多样的性质，同时，蛇毒蛋白的研究成果也为多种学科的基础理论和应用研究提供了特殊资源，并在人类各大方面发挥着重要的作用，特别是在人们认识自然和天然资源利用的过程中[5-6]。毒蛇咬伤会引起患者各种各样的临床症状，可能是由于毒蛇的种类、生理状态、地理来源和年龄上的差异导致的，其本质原因就是蛇毒组分和生物活性的差异[7]。国内外有关于蛇毒组成及其功能多样性的研究十分广泛，一般认为造成蛇毒差异取决于宏观和微观两方面：宏观水平上，环境成为驱动蛇毒蛋白组分及功能多样化的关键因素取决于它具有可塑性这一特性，具体表现为环境因素中的季节变化、栖息地、年龄和食性结构等都对蛇毒差异造成了一定的影响[8-11]；微观水平上，遗传结构的固定性也是影响蛇毒蛋白组分及功能多样化的重要因素，具体表现为转录机制、翻译后修饰等对蛇毒差异造成的影响[12-15]。
本研究是以国产舟山眼镜蛇和孟加拉眼镜蛇为对象，用两种不同类型的食物（变温动物和恒温动物）对两种眼镜蛇进行定期的实验室投饲，比较食物处理前后眼镜蛇的排毒量特征及所分泌蛇毒中各蛋白组分的构成情况，旨在探讨食性环境的变动对两种国产眼镜蛇蛇毒蛋白组构成的差异是否存在即时性驱动效应。
1 材料与方法
1.1 动物采集投饲与蛇毒提取
从浙江舟山和广西百色分别收购舟山眼镜蛇和孟加拉眼镜蛇各8条，带回实验室后，用40×25×15 cm的抽屉式整理箱单蛇单箱关养，期间提供充足的饮水。将两种眼镜蛇分别禁食一周以后，用咬膜皿法提取蛇毒，同时记录排毒量特征：蛇毒鲜重（wet mass）、蛇毒干重（dry mass）、蛇毒体积（volume）以及蛇毒的干物质量（solid content）[16]，作为野外来源的蛇毒样品，同时并记录眼镜蛇的形态特征：头长（HL,head length）、头体长（SVL,snout-vent length）、尾长（TL,tail length）和体重（BM,body mass）。随后，将两种眼镜蛇都平均分成两组，每组4条，一组投饲恒温动物小白鼠，另一组投饲变温动物中华大蟾蜍，饲养期间提供充足的饮水。每周定时定量投饲一次，两种眼镜蛇均投饲两个月，随后再禁食一周，期间提供充足的饮水，再次用咬膜皿法提取蛇毒，同时记录排毒量特征，作为动物摄取不同食物后所分泌的样品。所提取的全部鲜毒均经10000 g 4 oC离心，除去杂质后经Labconco冷冻离心干燥机干燥后，保存于‒80 oC超低温冰箱备用，同时记录排毒量指标。