2.2.2  黄瓜幼苗的培养及处理

1、选取颗粒饱满的津研9号黄瓜种子，1%次氯酸钠消毒30min后用去离子水冲洗多次，温汤浸种，将种子用布包好，置清水中浸泡3-4小时，再置于50-55度温水中浸泡15分钟；用多层湿布包好，于24-35度温度下催芽，每隔6小时翻动一次，并注意补充水分。

2、当黄瓜种子发芽后，胚根长达5至7cm长时进行移苗。选取15×20cm的白色塑料培养盆（外周刷上黑漆，模拟植物根系黑暗的生长环境），内置约五分之四的纯水，用纱布包裹珍珠棉（其上有15至20个小洞），固定黄瓜幼苗的稳定生长。每盆培养盆中栽种约12棵黄瓜幼苗，待长势齐整后去除长势不均的苗，以保证生长的同一性。

3、当黄瓜植株在没有外界营养物质供应的情况下，消耗自身子房内养分，大致7天后，用改良霍格兰氏培养液进行培养。

4、水溶性的甘氨酸钼（Gly-Mo）、谷氨酸钼(Glu-Mo)、色氨酸钼(Ser-Mo)、缬氨酸钼(Val-Mo)、肌醇钼及山梨醇钼分别设置五个浓度梯度，以钼酸钠为对照，每处理三个重复，对三叶一心期的黄瓜幼苗进行根施（浓度为2mg/L、5mg/L、10mg/L 、15mg/L、20mg/L）处理，每三天处理一次，第三次处理后一周进行各项生理指标的检测，筛选出效应最佳的络合态钼肥。

5、选用筛选出的效应最佳的络合态钼肥，对黄瓜幼苗进行叶面喷施（浓度为10mg/L、20mg/L、30mg/L 、40mg/L、50mg/L），筛选最有利于黄瓜幼苗生长发育的叶面喷施浓度。

2.2.3  黄瓜叶片叶绿素含量检测

1、取样：取植株第三片或第四片叶片(保持同一层次)，洗净擦干，用打孔器打孔，每盆取三片叶片，每片打孔两个，形成小圆片。用剪刀将两片小圆片重叠剪成一毫米宽度的细丝状，放入刻度试管中。

2、浸提：在刻度试管中加入混合液定容至10mL，将剪碎的叶片浸入其中，封管。立即将已经加过试剂的刻度试管放入避光条件的恒温箱中（25℃），直至细丝完全变白为止（过夜即可）。中间轻轻摇晃几下，可以缩短提取时间。

3、比色：为弥补可能由于溶剂挥发带来的损失，用混合试剂重新定容至10毫升，晃匀后，将管内溶液倒入比色皿中测定叶绿体色素提取液的光吸收值。以丙酮无水乙醇混合试剂为空白，在663nm、645nm下测定光吸收值。源`自,优尔`.论"文|网[www.youerw.com

4、计算：首先计算提取液的叶绿素浓度（CV,mg/L）。

Chla=12.7OD663-2.69OD645

Chlb=22.9OD645-4.86OD663

Cv=Chla+Chlb     

然后按下面以单位叶面积表示的叶绿素含量（mg/dm2）：CA=Cv1/1000*10*100/S=CV/S

这里的CA和CV的下标A和V分别代表面积和体积，S为用于提取叶绿素的叶片面积（cm2）。

2.2.4  黄瓜幼苗根系活力检测

1、用纯水将植物根系洗净吸干水分，称取根尖样品0.5g，放入小烧杯中，加入0.4%TTC溶液和磷酸缓冲液各5ml，使根充分浸没在溶液中，在37℃下暗保温1～2h，此后立即加入1mol/L硫酸2ml，以停止反应。

2、于此同时，做一组空白实验。先加入1mol/L硫酸2ml，再加入样根0.5g，加入0.4%TTC溶液和磷酸缓冲液各5ml，使根充分浸没在溶液中，在37℃下暗保温1～2h，此后不再加硫酸。

3、把根取出，用吸水纸吸干水分，放入研钵中，加乙酸乙酯3～4ml，充分研磨，以提出TTF。把红色提取液移入刻度试管（可用10ml小定容瓶代替），并用少量乙酸乙酯把残渣洗涤2～3次，皆移入刻度试管，最后加乙酸乙酯定容至10ml，用分光光度计在波长485nm下比色，以空白试验作参照测出吸光度，查标准曲线，求出TTC原量。