亚精胺对淹水胁迫下玉米幼苗根系呼吸代谢的调控(3)
1、对照（CK）：用Hoagland营养液培养，同时叶面喷施清水。
2、淹水处理：用Hoagland营养液培养的同时加水至液面高于沙面2cm为宜，同时叶面喷施清水。
3、淹水+亚精胺（1mmol/L）处理：用含有亚精胺（1mmol/L）Hoagland营养液培养的同时加水至液面高于沙面2cm为宜，同时叶面喷施1mmol/L的亚精胺。
分别于处理后第0、2、4、6d时取根样（0.5g）进行各项指标的测定。实验重复3次，取平均值。
2. 测定项目及测定方法
2.1无氧呼吸代谢酶活性的测定
2.1.1 酶液的提取
参照Mustroph和Albrecht的方法[6]提取酶液。方法如下：
把已取样的玉米幼苗根系（0.5g）于预冷的研钵中，加入2.0mL预冷的Tris-HCL（pH6.8）提取液（内含5mmol/L MgCl2、5mmol/L β-巯基乙醇、15%甘油、1mmol/L的EDTA、1mmol/L EGTA和0.1mmol/L PMSF苯甲基磺酰氟），冰浴下研磨成匀浆，把匀浆分别转移到离心试管中（贴好标签）。在4℃，12000r条件下离心20min,取上清液即为粗酶液并量其体积。
2.1.2乳酸脱氢酶(LDH)活性的测定
参照Bergmeyer的方法[7,8]测定LDH活性。方法如下：
取3.0mL Tris-NaCl-NADH缓冲液（pH7.5）于试管中,加入150μl酶提取液混合均匀后，用0.5ml Tris-NaCl-丙酮酸启动反应，倒入比色皿中，测定在340nm波长处吸光值的变化（测定时间为1min）。
2.1.3丙酮酸脱羧酶（PDC）活性的测定
参照Waters等的方法[9]测定PDC活性。方法如下：
取1mL50 mmol/L MES缓冲液（pH6.8）(内含25mmol/L NaCl,1mmol/L MgCl2，0.5mmol/LTPP,2mmol/L DTT,0.17mmol/L NADH, 50mmol/L草氨酸钠，10U ADH)于试管中，加入50μl酶提取液混匀后，用10μl 10mmol/L丙酮酸启动反应，倒入比色皿中，测定在340nm波长处吸光值变化（测定时间为1min）。
2.1.4乙醇脱氢酶(ADH)活性的测定
参照陈强，郭修武等[10]的方法测定ADH活性。方法如下：
取3.0 mL反应液150mmol/L Tris—HCI(pH值8.0)，内含0.3 mmol/L NADH于试管中，加入50μl酶液使其混合均匀，然后加入30μl 95％的乙醇启动反应，倒入比色皿中，测定在340nm波长处吸光值的变化（测定时间为1min）。
蛋白质含量测定参照Bradford的方法 [11]。酶活性的计算参照张义等方法[12]。其中以每分钟OD值变化0.01为1个酶活性单位(U)，ADH活性（U•g-1 protein •min-1）
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