1.2 里氏木霉

  里氏木霉是一种嗜温的腐生真菌，被广泛应用于生产食品、饲料、纺织等行业用纤维素酶和半纤维素酶[5]。里氏木霉所产纤维素酶产量高，产生的纤维素酶是胞外酶，易与菌体分离纯化从而得到所需的酶。里氏木霉及其代谢物安全无毒，不会影响生产人员和环境安全。里氏木霉产生的纤维素酶主要包括内切葡聚糖酶、纤维二糖酶、β-葡萄糖苷酶[6]。但里氏木霉常常存在β-葡萄糖苷酶活力较低的不足，导致纤维二糖积累，降低酶解效率[4]。本文针对里氏木霉种子培养时期设计相关变量，进行培养条件的优化，确定种子培养基的最适碳源、氮源及其添加量，种子最适培养时间，最适培养温度等。

2 材料与方法

2.1 菌种

    里氏木霉RutC-30

2.2 培养基

 种子培养基

 玉米浆0.2％、硫酸铵0.14％、硫酸镁0.03％、葡萄糖0.1％、磷酸二氢钾0.2％。

变量种子培养基

表1 变量为C源和N源的种子培养基的组成

变量                          组分

C源   微晶纤维素            硫酸铵0.14％   硫酸镁0.03％   葡萄糖0.1％   磷酸二氢钾0.2％

       0.1％、0.2％、0.5％       

       秸秆                  硫酸铵0.14％   硫酸镁0.03％   葡萄糖0.1％   磷酸二氢钾0.2％

       0.1％、0.2％、0.5％    

N源   酵母膏               玉米浆0.2％    硫酸镁0.03％   葡萄糖0.1％   磷酸二氢钾0.2％

       0.1％、0.15％、0.2％

       蛋白胨               玉米浆0.2％    硫酸镁0.03％   葡萄糖0.1％   磷酸二氢钾0.2％

       0.1％、0.15％、0.2％

发酵培养基：参考Mandels培养基[7]，成分如下：0.14％硫酸铵、0.2％磷酸二氢钾、0.03％尿素、0.03％氯化钙、0.03％七水合硫酸镁、3％秸秆。微量元素100X（0.5％七水合硫酸亚铁、0.16％水和硫酸锰、0.2％氯化钴）

  用盐酸、氢氧化钠调节溶液pH至4.8，定容至1000ml。

2.3 变量设置与培养基数量

2.3.1 种子培养基

a、种子培养基成分与含量处设置变量（碳源为秸秆，微晶纤维素0.1％、0.2％、0.5％。氮源为酵母膏，蛋白胨0.1％、0.14％、0.2％）共12瓶。

b、种子培养时间设置变量（24h、16h、8h）共3瓶。

c、种子培养温度设置变量（24℃、26℃、32℃）共3瓶。

d、接种到发酵培养基中的接种量设置变量（接种2ml、3.5ml、4ml、5ml）共1瓶即可。

因此种子培养基共19瓶，每瓶40ml。