摘要为理解大豆耐盐响应机制，本研究探索了耐盐基因 GmMYB176 在大豆根部的过量表达。 本实验中，我们从大豆根中提取总 RNA，将其中的成熟 mRNA 逆转录成 cDNA。经过 PCR 扩增 获得目的基因 ORF 片段，通过酶切连入 pDL28/Ubq10::RFP载体，即 pDL28-35S::GmMYB176

/Ubq10::RFP表达载体。将该表达载体转化至发根农杆菌 k599 中，转染大豆子叶节获得转 基因根。最后，利用体式荧光显微镜筛选获得了阳性转基因根。本研究的开展可为后续解析 GmMYB176 促进大豆耐盐能力的分子机制奠定基础。89080

毕业论文关键词：大豆；发根农杆菌 k599；GmMYB176；耐盐基因；过表达

Abstract In this study, the GmMYB176 gene was overexpressed in soybean root。 Firstly, the total RNA was isolated from the fresh roots of Union85140 soybean seedlings。 Then, the cDNA was gained from mature mRNA by reverse transcription。 Thirdly, the target gene was amplified by high-fidelity PCR and cloned into the plant expression vector pDL28/Ubi10::RFP。 The pDL28-35S::GmMYB176/Ubq10::RFP construct was then transformed into the cotyledonary node wound via Agrobacterium rhizogenes strain K599。 Finally, the transgenic roots were selected by fluorescence microscope。 This study will provide important material for further understand the molecular mechanism of GmMYB176 on enhancing soybean’s tolerance to salinity。

Keyword: Soybean;  Agrobacterium  rhizogenes  strain  K599; GmMYB176; Salt tolerant gene; Overexpression

目 录

引言 5

1。 研究材料与试剂 6

1。1。 实验材料 6

1。2。 质粒载体与菌种 6

1。3。 实验试剂 6

1。4。 培养基 6

1。5。 主要仪器 7

1。6。 PCR[11]扩增引物列表 7

2 研究方法 7

2。1。 大豆根中总 RNA 的提取（康为世纪康为世纪 RNApure Plant Kit）及检测 7

2。2。 大豆根中提取的总 RNA 反转录 cDNA 8

2。3。  通过 PCR  技术对 GmMYB176 cDNA 全长片段的克隆 8

2。4。 目的片段的电泳回收 9

2。4。1。  从琼脂糖凝胶中回收 DNA 9

2。5。  克隆载体与目的 DNA 片段的连接 10

2。5。1。 pMD18-T vector  载体和目的 DNA 片断的连接 10

2。6。 大肠杆菌感受态细胞制备与转化 10

2。6。1。 大肠杆菌感受态细胞制备 10

2。6。2。 热激法转化大肠杆菌感受态细胞 10

2。6。3。  质粒 DNA 的大量提取 10

2。7。 GmMYB176 OE 植物表达载体的构建 11

2。7。1。 pDL28HA-GmMYB176OE-RFP 的载体构建 11

2。8。 酶切验证 pDL28HA-GmMYB176OE-RFP 质粒 12

2。9。 载体 pDL28HA-GmMYB176OE-RFP 导入农杆菌 12

2。10。 含有阳性克隆的农杆菌的验证 12

2。11。 通过菌落 PCR 法鉴定 pDL28HA-MYB176OE-RFP 的阳性克隆