图3-1 大肠杆菌菌落实验结果图

12

图3-2 大肠杆菌革兰氏染色实验结果图

大肠杆菌乳糖发酵实验结果图

12

图3-3 大肠杆菌乳糖发酵实验结果图 13

图3-4 大肠杆菌甲基红实验图

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图3-5 大肠杆菌吲哚实验图

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图3-6a 卡那霉素 14

图3-6b 无卡那霉素 14

图3-7 琼脂糖凝胶检测图

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图3-8 大肠杆菌生长曲线图

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图3-9 硫酸铵浓度对包涵体产量的影响

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图3-10 接种量对菌种培养的影响图

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图3-11 发酵罐接种量对菌体浓度影响

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图3-12 不同温度情况菌种生长情况图

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图3-13 补料时间对菌体浓度的影响图

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图3-14 诱导点对包涵体获得量的影响图

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表清单

表序号 表名称 页码

表1-1 发酵过程条件控制项目表 5

表2-1 常用试剂 6

表2-2 常用仪器 7

表3-1 大肠杆菌OD值随时间变化的关系 15

表3-2 硫酸铵浓度对于包涵体含量的影响 16

表3-3 二级种子接种量对于菌液OD的影响 18

表3-4 发酵罐接种量对菌体浓度的影响 19

表3-5 发酵温度对菌液OD值的影响 20

1绪论

肠激酶的底物酶切位点序列具有高度的特异性[1]，具有很大的市场潜力，优化肠激酶生产技术也具有较大的商业价值。肠激酶的发酵生产主要是和胰岛素生产方法相同，目前制药公司生产胰岛素主要是利用发酵工程生产基因重组的大肠杆菌，然后对菌种进行下游处理：破碎得到包涵体、处理包涵体、变性复性等。最终得到目的产物胰岛素。肠激酶的生产也是按照此方法。

为提高重组大肠杆菌的产量，使大肠杆菌中包涵体的含量提升，可以通过控制发酵条件，满足重组大肠杆菌发酵培养的最优条件，最终使肠激酶的产量得到提高。发酵条件的主要控制项目和方法如下：

表1-1 发酵过程条件控制项目表

控制项目 控制方法

温度 冷凝水或温水

补料 软件控制补料泵和补料时间

罐压 进气量和排气量

菌体浓度