HCl

消泡剂

2.2 仪器

表2-2 常用仪器

隔水式电热恒温箱 超净工作台 恒温震荡器

紫外分光光度计 反应式摇床柜 离心机

PH计 30L发酵罐 琼脂糖电泳仪

微波炉 紫外检测仪 显微镜

恒温磁力搅拌器 循环式真空抽水泵 均质机

2.3 实验菌种

含有重组肠激酶的大肠杆菌

2.4 试验方法

2.4.1 生产肠激酶工程菌的鉴定

(1)大肠杆菌菌落实验

 1、接种培养:

①制备平板:将牛肉膏0.3g、蛋白胨1g、NaCl 0.5g、琼脂1.5—2.0g、加水(小于100ml)、搅拌均匀,调PH至7.4-7.6,定容至100ml,转入锥形瓶内,封口;

②灭菌:高压蒸汽灭菌锅、121℃,30min,冷却至40℃左右;

③倒平板:取100ml培养基,倒成5个平板,放置凝固;论文网

④用接种环将稀释好的菌液均匀的涂到固体培养基上;

⑤在37℃恒温培养箱中培养12-24h;

 2 革兰氏染色观察菌落形态:

①在载玻片中央滴一滴蒸馏水,在无菌操作台上用接种针从大肠杆菌平板上取少量菌苔于水滴中,混匀,涂片成一层水膜

②在空气中自然干燥

③涂片朝上,通过火焰三次,以热而不烫为宜使细胞质凝固细胞形成固态粘附在玻片上

④在制片上滴加结晶紫染液,1min后,用自来水缓慢冲洗掉多余的染料

⑤滴两滴碘液,染色1分钟后,用清水缓慢冲去多余染料,动作轻柔

⑥脱色:滴加酒精,摇动玻片半分钟后用水缓慢冲洗

⑦滴加石炭酸复染液1分钟,水洗

⑧滤纸吸干,油镜镜检

 (2)大肠杆菌乳糖发酵实验

 1 大肠杆菌乳糖发酵实验方法和步骤:

①取乳糖发酵培养基加水配制成乳糖发酵培养基

②每个试管取5-6ml乳糖发酵培养基,将杜氏小管倒置放到试管内,用棉花塞上

③用牛皮纸将试管口包扎好,放到高压灭菌锅121℃灭菌30分钟。

④在无菌操作台中取大肠杆菌接种到四个试管中,第五个试管作为对照,置于隔水式恒温箱中培养。培养若干时间,在4h、5h、6h、7h、8h的时候进行观察。

 (3)、大肠杆菌甲基红实验

甲基红实验的方法和步骤:配制蛋白胨水培养基,蛋白胨1%,Nacl0.5%,分装之后灭菌,冷却,然后挑取平板上的大肠杆菌菌落接种到试管中,置于恒温培养箱中培养24小时。取出,滴加2-3滴甲基红试剂,观察试管培养液上层。阳性为红色,阴性为黄色。

(4)、大肠杆菌吲哚实验

配制蛋白胨水培养基试管三只,其中一个为空白对照。然后对另两个试管接种。挑取少量大肠杆菌菌苔到试管中,置于37℃恒温培养箱中培养24小时。加入乙醚,萃取吲哚,待乙醚层浮于培养液的上方,此时沿着试管壁加入吲哚试剂,若乙醚层为玫瑰红色,则为吲哚试验阳性反应,反之为阴性[7]。

(5)、大肠杆菌卡那抗性试验

卡那抗性试验方法和步骤

①制备平板:将牛肉膏0.6g、蛋白胨2g、NaCl 1g、琼脂2-3g、加水(小于100ml)、搅拌均匀,调PH至7.4-7.6,定容至200ml,转入锥形瓶内,封口。

上一篇:NO.555定量分析方法的建立
下一篇:常温土壤环境中嗜热香草酸降解菌的分离与性质的研究

羟基腈裂解酶在大肠杆菌...

重组鼠李糖苷酶的表面展...

Rhodotorulasp.发酵生产类胡萝卜素及提取的研究

Rhodotorulasp.发酵生产类胡萝卜素的动力学研究

欧文氏杆菌发酵生产氨基葡萄糖的动力学研究

欧文氏杆菌发酵生产氨基葡萄糖及其提取研究

重组巴斯德毕赤酵母产内...

老年2型糖尿病患者运动疗...

麦秸秆还田和沼液灌溉对...

ASP.net+sqlserver企业设备管理系统设计与开发

新課改下小學语文洧效阅...

张洁小说《无字》中的女性意识

LiMn1-xFexPO4正极材料合成及充放电性能研究

安康汉江网讯

我国风险投资的发展现状问题及对策分析

互联网教育”变革路径研究进展【7972字】

网络语言“XX体”研究