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图3-8 不同通气量对菌株生长的影响 10

图3-9 XR-D对碳水化合物的利用情况

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表清单

表序号 表名称 页码

表2-1 PCR反应体系 5

表2-2 PCR反应条件 5

1 绪论

在我国，均三嗪类除草剂由于其高效低毒，水溶性差的特点，被广泛运用于我国的旱地除草剂[1]。其中，较为典型的品种有西玛津，阿特拉津，扑草净等。然而随之而带来的环境污染的问题也越来越明显，受到废弃工厂所残留的工业化合物污染的土壤，往往不能被重新利用，造成大量土地浪费，甚至成为“无人区”。因此对其采用何种修复引起了人们的重视。

生物修复，简单来说就是人为创造各种条件促进生物降解过程[2]。这里提到的生物降解一般指微生物的降解，因微生物具有种类多，分布广，繁殖快，易变异，有很强的适应能力，对各类合成农药试剂能较快产生降解酶系等优势，所以微生物降解法得到普遍肯定，被认为是最具有潜能的修复法。它在加速农药降解过程中发挥着举足轻重的作用，效率高，应用范围广泛，且相对于物理，化学修复来说，更加安全，不会产生二次污染或者造成污染物的转移，一般来说，化学途径的降解只能将除草剂部分降解，而微生物降解可以将除草剂彻底分解为二氧化碳，水和其它一些无机物；在另一方面，生物修复的成本是所有类型的修复中最低的[3]。土壤，地下水，海洋中往往残留有农药，是研究者取样的主要来源。

1.1生物降解的研究现状与方法认论文网

研究者为了筛选某种目标作用物的降解菌株，通常是通过对长期使用一种受农药污染的土壤或者水体进行取样，然后经过富集驯化，从而得到该目标作用物降解株。在过去几十年来，虽然有学者分离得到降解均三嗪类化合物的菌株，但是对于筛选出能够彻底矿化结构复杂的化合物的微生物较少[4]。生物降解受到环境条件以及菌株来源等的影响，从这些角度出发，我们选取受到均三嗪类除草剂长期污染的工业废水污染区的泥土。

1.2本章小结

本实验通过利用均三嗪类化合物对该土壤菌的富集驯化，进一步对该菌株进行分离鉴定从而确定其分类学地位，最终希望能够分离筛选出既能够降解工业污染物又能够降解均三嗪类化合物的菌株，不但丰富了均三嗪类化合物污染环境修复的微生物材料，对于开发农药降解菌资源产生重要意义，而且对于国内的大量废弃工厂地区的重建具有建设性意义。本实验下一步试图对该降解菌进行降解途径过程的分析，主要通过生理生化和血清学测定，为下一步培育大量该优势菌种或者构建工程菌提供科学依据，从而在自然环境污染修复中得到广泛应用。

2 材料与方法

2.1土壤来源

取自新沂农药厂附近所产生废水污染过的泥土

2.2 培养基

LB固体培养基：酵母粉5.0g, 胰蛋白胨10.0g, NaCl 10.0g, 琼脂粉20～22g, pH7.0～7.2，加蒸馏水定容至1L。无机盐培养基：MgSO4·7H2O 0.2g，NaCl 0.5g，K2HPO4 1.5g, KH2PO4 0.5g, NH4NO3 1.5g，加水至1L。以上培养基均在 121℃ 灭菌 30min 备用。

2.3 降解菌的富集培养与分离

取土壤10 g于250 mL三角烧瓶中，加入50 mL培养液A( 无机盐培养液；0.0025g均三嗪). 30℃间歇振荡（180r/min）培养5天(每天振荡 3 荡/mimin) .取上层浊液一环于内含 50 mL培养液A的三角瓶中, 30℃振荡（180r/min）培养5天， 再取一环菌液同样培养 3次 (农药量依次加倍 )。将菌液在LB固体培养基中涂布划线分离筛选，30℃培养5d后，挑出单菌落接种于LB固体培养基上。5次纯化后，挑出单菌落进行鉴定[5]。