虫草菌有调节免疫、抗肿瘤、降血脂、抗病原微生物、抗真菌等作用,而虫草菌的作用主要来自于虫草素,虫草素是在1951年从北虫草的原浆液中首次提纯得到,也是我国名贵药材中的冬虫夏草的有效成分[5]。
虫草酸和虫草素能够调理人体生理环境,加强巨噬细胞的吞噬功能[5]。虫草素还有抗癌细胞浸润作用,其抗癌作用可能与阻遏端粒酶活性有关[6]。研究发现,虫草素可以抑制癌细胞的生长,方式为轻度剂量依赖抑制[7]。
虫草素有明显的降血脂的作用。虫草素可以与AMPK很好地结合,原因是虫草素可以对HepG2细胞作用,一定时间后,细胞存活率增加,降低细胞内甘油三酯含量[8]。虫草素可能通过激活AMPK诱导起下游的PPAP表达从而降低细胞内甘油三酯含量从而降低血脂[8]。降血脂却是一个相对缓慢的过程,但是虫草素在细胞内的代谢速度非常快,可能是虫草素在体内发生了某些反应是它转化成其他代谢物才能起降血脂的作用[8],有待于我们继续研究,延长虫草素在体内的代谢时间,降低它的代谢物在体内的分解速度将是目前需要解决的问题和发展的方向。
虫草菌素在抗病原微生物方面有重要作用,比如对枯草芽孢杆菌等细菌有抑制作用,同时对一些病毒,比如对HIV的侵染及其反转录有抑制效果。研究表明,虫草菌素对侵入型念珠菌、类腐败梭菌、西方马脑炎病毒RNA的合成都有抑制作用[5]。文献综述
有研究指出,虫草素在治疗白血病方面的主要作用是抑制其病变细胞的复制并最终导致其凋亡。实验表明虫草菌素与诱导末端拖延核苷酸阳性白血病细胞的凋亡和提高PKA的活性有很大的关联性[5]。
在利用其它天然产物研究方面,虫草菌能利用三七中的营养物质作为生长所需的碳源和氮源产生虫草素。虫草菌可以产生的糖苷酶,水解人参皂苷侧链上的糖基,使得三七中的皂苷由大极性转变为小极性,使皂苷产量增大,并且在体内转化过程中产生虫草素、甘露醇等成分,而且甘露醇的含量和野生虫草中的含量相近[9]。虫草的生物转化起到一举两得的作用。
本文基于LC-MS技术[10]研究利用虫草菌转化银杏黄酮。实验一方面尝试用虫草菌来转化银杏黄酮,希望通过虫草菌能提高银杏黄酮含量及其药用成分活性。另一方面探索利用一些废渣来生长大型真菌的可行性,变废为宝,节约资源。
2 材料与方法
2.1 实验材料
(1)供试材料:银杏叶(釆自江苏师范大学校园,烘干),北虫草菌(储存自江苏省药用植物重点实验室),土豆(购置于市场)
(2)主要仪器器材:高压蒸汽灭菌锅(SANYO三洋 高压蒸汽灭菌器,日本Panasonic松下株试会社),超净工作台
2.2 实验方法
2.2.1 样品准备
(1)活化菌株,制备北虫草种子液
取土豆(200克),葡萄糖(20克),琼脂(20克),加水至1000mL,搅匀,分装到4*500ml锥形瓶内,在121℃的条件下高压灭菌(20分钟)。
取土豆(80克),葡萄糖(8克),加水至400ml,搅匀,分装到 20*50mL的锥形瓶内,在121℃的条件下高压灭菌(20分钟)。
在超净工作台上从装有原始北虫草菌菌株的试管中将虫草菌接种到含有PDA培养基的平板上,放置在恒温箱中5-7天,将虫草菌接种到含有PDA液体培养基的锥形瓶里,20℃摇瓶4-5天得到北虫草菌种子液[11]。
(2)配置培养基、灭菌
配置大米培养基:取30克大米,磨成粗粉,分装到2个的锥形瓶内,加入PDA培养液,加入量要浸透大米,在121℃条件下高压灭菌20分钟。