小热休克蛋白和其他的大分子热休克蛋白不同，大多数的小分子热休克蛋白基因一般不表达，当细胞受到外界刺激（紫外线、高温、渗透胁迫等）的时候才会显著表达。小热休克蛋白同样是这六大家族中的重要一员，其分子量大小通常是在15—30kD，但是也有以12—43kD大小进行划分的，小热休克蛋白是一个极具多样的家族[6]。物种不同则所含的小热休克蛋白也不同；在不同的组织中小热休克蛋白的表达量也是不同的。到目前为止科学家们已经发现了10种哺乳动物小热休克蛋白，分别称作HSPB1-HSPB10。根据小热休克蛋白的结构特征和功能可以把它划分为两个亚家族：Ⅰ类亚家族包括HSPB1、HSPB5、HSPB6和HSPB8，这些成员呈泛素化表达；Ⅱ类亚家族包括HSPB2、HSPB3、HSPB4、HSPB7、HSPB9和HSPB10，这些成员仅仅在肌源性组织和睾丸组织中表达。在高等植物中以20—40KD的小热休克蛋白最为丰富。在植物体中，小热休克蛋白都是由和基因编码的蛋白。根据小热休克蛋白的序列，免疫反应以及其在细胞内的定位，可以把它分为六大类。其中第Ⅰ、Ⅱ以及Ⅲ类都位于细胞核或者是细胞质内；其余的三类则位于叶绿体、内质网或者是线粒体中。已经有大量的研究可以证明机体不管是在正常生理状态下还是在应激状态下小热休克蛋白都会进行对应的表达来参与机体的生理活动。小热休克蛋白有两个部分构成，分别是C端和N端。C端具有一个保守区域，其结构与α晶体蛋白的C端相似，用来编码大约110个氨基酸残基。小热休克蛋白的功能是在细胞或是生物体遭受到外界胁迫时实施分子伴侣的功能，可以恢复以及稳定细胞的内环境。小热休克蛋白在生物体内的存在形式是一个低聚复合体（200—800kD）。无论生物有机体是处于应激状态还是正常生理状态，小热休克蛋白在跨膜运输转运、免疫、变性的蛋白重新折叠、细胞凋亡、信号转导以及细胞骨架和和股价稳定等方面都起到了重要的作用。基于以上小热休克蛋白的信息，可以看出对于小热休克蛋白的研究是非常必要的[7]。而构巢曲霉中新发现的sHSP7就是属于小热休克蛋白家族的。

1 材料与方法

1.1  实验材料

构巢曲霉；PCR 仪、Bio-Rad 电泳仪、实时荧光定量 PCR 仪、振荡水浴锅、研钵、超净工作台、冷冻离心机、移液枪、打孔器、浓度测定仪等；Trizol、 Taq DNA 聚合酶、 DEPC 水、 dNTP、 反转录试剂盒 First Strand cDNA Synthesis Kit（Thermo） 、Ss0FastTM EvaGreen Supermix（Bio-Rad） 、PDB、NaCl、氯仿、异丙醇等。

1.2  实验方法 文献综述

1.1.1 引物设计sHSP及内参引物

用自来水冲洗1～2次，然后去除外果皮取出种子，剥去种子的种皮后，在超净台上用75%的酒精浸泡35s，用无菌水漂洗3次，转入0.1%升汞溶液中灭菌，时间分别为3.5min，用无菌水漂洗3～4次。

1.2.2 预实验

在灭完菌的超净台上，取出桂花种子中的幼胚接种到诱导愈伤组织的培养基，每瓶接种4个外植体（图1，B）。培养温度25℃，先进行30d 暗培养，然后转入光培养，每天光照14h，光照强度1500～2000lx。之后定期的观察幼苗的生长状况、测量相应的苗高，并且做好相应的记录。

1.2.3 菌体的处理

用打孔器（直径为7毫米）分别在已经活化了四天的菌体平板上打六个孔；将这六个菌饼分别转接到250ml培养瓶中，每个培养瓶含有100ml的PDB培养基。按以下条件处理：

处理条件一：把PDB培养基的渗透压设置4个组即NaCl-15，NaCl-30，NaCl-45，NaCl-60；每个组内做三个重复实验。

处理条件二：将PDB培养基设置3个组即缺CN的PDB培养基，缺C的PDB培养基，缺N的PDB培养基，每个组内做三个重复实验。