2.1.2实验试剂

ATP酶测定试剂盒50 T/48样（试剂组成及配制，见表Ⅰ）、生理盐水（0.9%）、蒸馏水。

试剂编号 剂量 注意事项

试剂一 液体10 l,3瓶 在4 ℃下可保存6个月

试剂二 液体10 l,1瓶 在4 ℃下可保存6个月

试剂三 液体10 l,1瓶 在4 ℃下可保存6个月

试剂四 粉剂,3支 在-20 ℃下可保存6个月,现用现配,用时每支可加蒸馏水至5 l。剩下的-20 ℃以下可以保存一周

试剂五 粉剂,1支 在4 ℃下可保存6个月。（使用时需配制：加蒸馏水至5 l，可适当加热溶解，在4 ℃可保存3个月）

试剂六 粉剂,1支 在4 ℃下可保存6个月。（使用时需配制：加蒸馏水至10 l，应充分加热溶解，于室温保存）

试剂七 液体10 l,2瓶 在室温下可保存6个月

试剂八 粉剂,3瓶 在4 ℃下可保存6个月。（使用时需配制：每瓶加水至40 l，充分溶解，之后可避光于4℃保存一周）

试剂九 粉剂,1瓶 在4 ℃下可保存6个月。（使用时需配制：加蒸馏水至100 l溶解，室温保存3个月）

定磷剂配制：按照双蒸水：2.5 mol/l硫酸：试剂八：试剂九=2：1：1：1的体积比进行配制。注意配好应为浅黄色，要现用现配

表2-1：ATP酶测定试剂盒：试剂组成及配制

2.1.3实验设备

DK-SI4电热恒温水浴锅、TGL-16B高速台式离心机、赛多利斯电子天平（200 g、500 g量程）、手动组织匀浆器、7504型分光光度计（1 cm光径比色杯一套）、若干10 lEP管和1.5 lEP管、1个1000 ul移液枪、1个100 ul移液枪、若干2种型号对应的枪头

2.2 实验预处理

2.2.1实验动物预处理

（1） 养水：在四个水箱中加入71cm3水，在阳光下曝晒2天（除去水中漂白剂等）

（2）加入钡溶液：在四个水箱中分别加入：

对照组：无添加

实验组A：加入0.1 mmol/l 钡溶液

实验组B：加入1 mmol/l 钡溶液

实验组C：加入2 mmol/l 钡溶液

（3）随机分配鲫鱼，做好实验前数据采集（每条鱼的重量及编号）每个水箱放入5条鲫鱼饲养，并且做好氧气持续供给，期间不投食不换水，饲养96h。期间观察其行为变化（鲫鱼游动及跳跃次数）

2.2.2肠道样本采集

（1） 依次取出各个水箱中的鲫鱼，做好饲养后的数据采集（按照编号体重称量）。

（2） 迅速处死鲫鱼，剖开鲫鱼腹部，取出肠道组织放入EP管中，贴上记号标签，留作备用。

（3） 实验时取出组织EP管，从中剪取0.1 g左右组织，使用移液枪加入0.9 l的0.9%生理盐水，放入研磨器中仔细研磨（注意研磨时需在冰袋中操作，防止温度过高破坏组织）直到其中残余组织几乎不见时，将其中的匀浆组织倒入1.5 l的EP管中，做好标签后迅速放入冰箱中，待使用。文献综述

2.3酶活性的测定