2。5 酶切验证 14

3  讨论 14

3。1 连接不成功的原因 14

3。2 转化不成功的原因 15

3。3 挑单克隆无阳性克隆的原因 15

3。4导致没有测序结果的原因 15

4  结论与研究展望 15

4。1 结论 15

4。2 研究意义 15

参考文献： 16

致谢 17

引言

1、XTH基因的结构

木葡聚糖(XG)是双子叶植物初生细胞壁中最主要的半纤维素。木葡聚糖最初被确定为从金莲花，罗望子和其他种子中作为种子贮藏多糖，后来由于细胞外多糖梧桐细胞悬浮培养，此后不久作为许多物种的主要细胞壁成分。该木葡聚糖在细胞壁扩展的控制中发挥中心作用的概念起源与由Albersheim组悬铃木细胞悬浮培养物的细胞壁的开拓性的分子模型和发现在豌豆胚轴生长素诱导的生长伴随着木葡聚糖代谢的增加。在40年间，因为木聚糖来到被视为一个控制细胞壁可扩展性不可或缺的组成部分，与纤维素和其他细胞壁成分如何相互作用木葡聚糖的概念已经有了相当大的发展。原假设制成共价连接的结构域组成的大分子基质的木葡聚糖，果胶和结构蛋白替换为较简单的栓网络模型，其中强调直接涂覆和圈养由木葡聚糖纤维素作为关键结构决定因素细胞壁可扩展性。尽管广泛接受这一模式，但模型中的无数个点没有被严格测试，它可能是由于高的机械可扩展性和许多初级细胞壁的灵活性兼容的结构太紧密。缺乏直接的纤维素，纤维素联系一些替代模式已有建议。木葡聚糖内转糖苷酶/水解酶(XTH)是一种由多种XTHs基因编码可以引起细胞壁中纤维素微纤网结构改变的细胞壁重构水解酶,是一类催化木葡聚糖分子转移或水解的酶,它能够内切木葡聚糖聚合体,将产生的还原性末端连接到另外一个木葡聚糖链或水分子上,在细胞壁重构、影响植物生长发育方面有重要作用。论文网

植物会在生长过程中发生细胞数量和细胞体积的变化，在细胞体积增大过程中，细胞壁会发生重构，有多种酶参与植物细胞壁重构与修饰的过程， 其中XTH 蛋白家族起了重要作用。XTHs是一类多基因家族编码的蛋白质，属于糖苷水解酶家族GH16，按蛋白结构特征将XTH蛋白和编码它们的基因分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ类，其中Ⅰ和Ⅱ类XTH具有转糖基酶活性，而Ⅲ类XTH具有水解酶活性。XTH家族的蛋白含有一个特征基序 DEIDFEFLG, 包含介导催化活性的氨基酸残基。对拟南芥 AtXTH22 基因定点突变进行研究，研究发现DEIDFEFLG 基序中首个谷氨酰胺残基对于催化活性是所必需的。通常催化位点附近的苏氨酸或丝氨酸残基被 N- 糖基化修饰。去除糖基的重组 AtXTH22 蛋白其酶活性减少了98%， 卷柏中也有发现类似的现象，表明 N- 糖基在维持酶活性方面起着至关重要的作用。

2、XTH基因的功能

2。1 酶学活性

在细胞体积伸长的过程中糖基转移酶介导多糖的某一部分与其自身连接，这是由Albersheim等人经研究提出的。从豇豆中纯化得到的催化木葡聚糖分子之间进行“分子嫁接”的酶， 这个假说首次证实了 Al-bersheim 的假设。后来在很多植物中也发现了其同源蛋白， 并且在2001 年的第 9 届国际细胞壁研讨会上将其定义为木葡聚糖内转糖苷酶/水解酶（XTH）。前期研究显示，XTH是一类多基因家族，其成员一般具有两种或其中一种酶学活性。其中一种为木葡聚糖内转糖苷酶活性，能催化木葡聚糖分子于自身相连接，另一种专一性水解木葡聚糖β-1,4 糖苷键，具有木葡聚糖内水解酶活性。