15。pCAMBIA2300-CymMV-FL 阳性克隆的大量获得及纯化 14

二、实验结果与分析 14

第二章 齿兰环斑病毒（ORSV）侵染性克隆的载体构建 16

1。 植物材料 16

2。 质粒载体材料 16

3。 分子生物学试剂 17

4。 齿兰环斑病毒侵染性克隆构建策略 17

5。 齿兰环斑病毒侵染性克隆构建所需引物 18

6。 染病兰花RNA提取及cDNA合成 18

7。 通过高保真PCR，为扩增的病毒全长添加酶切位点 18

8。 对获得的病毒全长PCR产物和表达载体的进行酶切处理 18

9。 酶切后病毒全长和表达载体直接进行连接反应 19

10。链接产物通过热击法转化大肠杆菌感受态细胞 19

11。通过菌落PCR法鉴定pCAMBIA2300-ORSV FL的阳性克隆 19

二、实验结果与分析 20

参考文献 22

前言

蝴蝶兰（Phalaenopsis hybrid）是兰科（Orchidaceae）蝴蝶兰属（Phalaenopsis）植物，属多年生常绿植物，多生长于遮阴、潮湿、多雾的环境中，如热带森林高处的树干上，溪涧附近潮湿的石块间。蝴蝶兰花朵色彩艳丽，形似翩飞的蝴蝶，姿态高贵典雅，深受花迷们的青睐，观赏价值极高，被称为“洋兰皇后”。蝴蝶兰的盛花季节正值中国传统春节，摆放可烘托节日喜庆、繁荣、富足的气氛，因而受到市场的欢迎与追捧，市场需求日益高涨，体现出蝴蝶兰极高的经济价值。论文网

蝴蝶兰生长存在生长缓慢，种子很难自然萌发，难利用分株栽培法进行繁殖，即使扩繁成功后得到的实生苗也会产生与母体较大的差异，无法保持优良性状，产生品种退化，导致种苗质量下降, 因此面对花卉市场需求的日益激增，传统生殖繁育方式难以满足市场扩大化后大量种植的需求，需要通过现代生物技术手段进行工厂化的大规模快速繁殖。

但是在实际的种植和培育中，兰科植物非常容易受到病毒感染。兰花病毒病常造成兰花叶片卷曲、褪绿，形成枯斑、坏死斑，植株矮化，生长畸形以及花朵变色等症状[1]，甚至导致植株死亡，严重影响兰花的观赏价值及经济价值，阻碍兰花产业的发展。

兰花病毒可以说是无处不在。它不但能感染人工培育的兰花品种，也能侵染生长在自然条件下的野生兰花。在兰科植物病害中，病毒病可以说是影响兰花生长的头号杀手[2]。兰花一旦受到病毒感染，无论是它的观赏还是栽培价值、药用价值都会极具下降。有关兰花病毒最早的记录是在1943年，澳大利亚人Magee在建兰上发现了一种“黑病”，经证实是建兰花叶病毒。兰花病毒至今尚未有彻底根治的药剂，所以被称为兰花癌症。

建兰花叶病毒(Cymbidium mosaic virus, CymMV)和齿兰环斑病毒(Odontoglossum ringspot virus, ORSV)是兰科植物中最为普遍的两种病毒，发病广泛并且危害较大[3]。容易感染CymMV病毒的兰花品种有墨兰、文心兰、大花蕙兰、报岁兰、嘉得利亚兰、虎头兰、万代兰及糊蝶兰等等[4]。CymMV属于马铃薯X病毒组[5]，ORSV属于烟草花叶病毒组[6]，能通过汁液、蚜虫和机械等方式侵染兰科及其他科共20多种植物现。目前，已广泛存在于全世界栽培兰花的地区，且带毒率相当高。