近年来,内生真菌被人们应用得越来越广泛，尤其在药用价值和食品上的应用越来越频繁，对内生真菌的研究达到了举足轻重的地位。如内生真菌生物活性物质的研究应用、药用植物的内生真菌的次生代谢产物及其生物活性的研究等，这些研究的发展对我们的生活产生了重大的影响，解决了不少我们生活中的问题，使我们的生活更进一步。 

1。材料与方法

1。1仪器准备

超净工作台（苏净集团安泰公司制造）

干式恒温器（杭州奥盛仪器有限公司）

DYY-6C行电泳仪（北京市六一仪器厂）

大容量恒温振荡器（太仓市实验设备厂）

XP基因扩增仪（杭州博日科技有限公司）

立式压力蒸汽灭菌器（上海中安医疗器械厂）

微量台式离心机（上海安亭科学仪器厂制造）

凝胶成像系统（杭州朗基科学仪器有限公司）

电热恒温培养箱（上海精宏实验设备有限公司）

MP21001电子天秤（上海恒平科学仪器有限公司）

漩涡混合器（海门市其林贝尔仪器制造有限公司）

SW-CJ-1F 洁净工作台（苏州安泰空气技术有限公司）

隔水式恒温培养箱（上海新蕾医疗器械制造有限公司）

D型四门双机横隔冰箱（钢胆）无磁铜管（杭州凯利不锈钢厨房设备有限公司）

剪刀、镊子、酒精灯、塑料平板、5 mL离心管、锥形瓶、烧杯、刀片、2 mL离心管、马克笔、计时器、锥形瓶、量筒、电磁炉、锅、勺子、纱布、接种针、漏斗、针筒、细菌滤器、1。5 mL小管、96孔板、牛津杯、移液枪、玻璃器皿、载玻片、盖玻片、枪头、酒精棉球、研磨器、锡箔纸、液氮生物容器、电泳槽、微波炉等。

1。2实验药剂

70%的乙醇、4%的84、无菌水、清水、蒸馏水、马铃薯、葡萄糖、琼脂、青霉孢子、抗生素、液氮、TE水、2×Tap Master Mix（近岸蛋白质科技有限公司）、digestion solution、NaCl、CTAB/NaCl溶液、氯仿、80%的异丙醇、20%的甘油等。

1。3 PDA的制作

1。3。1 材料准备

马铃薯200 g；葡萄糖20 g；琼脂15-20 g；锅；电磁炉；量筒；烧杯等。

1。3。2固体PDA制作过程文献综述

（1）土豆削皮切成块，两份一共400 g,放1500 mL蒸馏水煮20 min,一定要边煮边搅动，防止土豆粘锅糊掉，影响实验。土豆煮烂后，然后用四层纱布过滤，倒掉土豆块；

（2）称取两份20 g葡萄糖和两份17 g琼脂；

（3）将葡萄糖和琼脂倒入过滤后的土豆液中煮至琼脂融化，边煮边搅动；

（4）将液体倒入量筒，未满2000 mL加蒸馏水至2000 mL,准备10个250 mL的三角锥形瓶进行分装塞紧瓶塞；

（5）将分装好的PDA放入高压蒸汽灭菌锅进行灭菌。

1。3。3液体PDA的制作

制作过程同上，只是无需加入琼脂其余相同。

1。4内生真菌的分离

1。4。1植物样本的采集

试验的材料是从盐城、徐州采摘的龟甲冬青、香榧、腊梅、石楠植株，将选取生长良好的植株枝条用袋子装好写上说明带回实验室。选取样本时不要选取带有黄叶、烂叶和带有病症的枝叶，要选取生机勃勃的、新鲜的样本，每种植株至少选取三个标本，若是植株样本上有泥垢或者其他脏东西，用纸擦干净，不清楚植株名字的可以拍照，之后方便鉴定，同时要做好相关信息的标注。

1。4。2清洗

将选取的标本进行清洗，去除标本表面的灰尘等不干净的物质，去除带有病态的叶子。

1。4。3取样

（1）在叶片的左上、左下、中间、右上、右下五个部位用刀片挖取边长为5 mm的正方形叶片，茎和比较细的叶柄用刀片切取长度为5 mm-10 mm ,若是教粗的叶柄或果实则将其切开分成小份，注意样本不能过大或过小。