植物内生菌（Plant Endophyte）是指一类在其部分或全部生活史中存活于健康植物组织内部，不会引发宿主植物表现出明显感染症状的微生物。就国内外研究现状我们可以了解到植物内生菌的作用以抗病虫害、抗菌抗肿瘤、促进植物生长、外源基因载体为主。由于植物内生菌能产生多种活性成分，在医药和农业方面应用较多，主要体现在抗肿瘤抗癌药物、生防剂、抗氧化剂、植物激素等具有市场前景和应用价值的代谢产物上。微生物产出活性物质是植物内生菌价值的一种体现，具体可以表现为植物内生菌可能和宿主植物进行联合代谢或基因的诱导表达，导致全新的生理活性物质的生产或原有的化合物超量生产[ ]。以上所述，都是可以继续加深研究并在未来实现工业化生产的论文网。

本论文的研究是从6中植株中分离纯化内生菌，通过管碟法筛选出具有抑菌作用的内生菌，对具有抑菌作用的内生菌菌株进行DNA鉴定，从而得到活性菌株。本实验的目的是为了从植物内生菌的发酵液中提取活性物质从而为本论文提供依据，为抗菌类天然药物和生防菌剂（生防菌，Biocontrol bacteria）的进一步开发提供依据，使植物内生菌这个巨大的资源能够得到更有效的利用、使用途更具体化。

1 材料与方法

1。1实验设备

SW-CJ-1F 洁净工作台 （苏州安泰空气技术有限公司）

生物显微镜 （COIC）

LDZX-50KBS 立式压力蒸汽灭菌器 （上海申安医疗器械厂）

MP21001 电子天平 （上海恒平科学仪器有限公司）

旋涡混合器 （海门市其林贝尔仪器制造有限公司）

D型四门双击横隔冰箱（钢胆）无磁铜管 （杭州凯利不锈钢厨房设备有限公司）

XP基因扩增仪 （杭州博日科技有限公司）

DNP-9052型 电热恒温培养箱 （上海精宏实验设备有限公司）

GNP-9050BS-CXXIII 隔水式恒温培养箱 （上海新苗医疗器械制造有限公司）

干式恒温器 （杭州奥盛仪器有限公司）

微量台式离心机 （赛默飞世尔科技公司）

DYY-6C型电泳仪 （北京市六一仪器厂）

台式离心机 （上海安亭科学仪器厂）

大容量恒温震荡器 （大仓市实验设备厂）

凝胶成像系统 （杭州朗基科技有限公司）

易创数字显微镜图像处理操作；磁力搅拌器；量筒；烧杯；锥形瓶；定容瓶；20μL、200μL和1000μL量程的移液枪；恒温水浴锅；电磁炉；微波炉；环氧乙烷灭菌的塑料培养皿；接种针；接种环；酒精灯；铝箔纸；1。5mL、10mL量程的离心管；冻存管；锅；计时器；剪刀；镊子；搪瓷缸；玻璃棒；载玻片；记号笔等。

1。2实验试剂和药品

1。2。1试剂

结晶紫（Cystal violet）染液。结晶紫2。0g，草酸铵0。8g，95%乙醇20mL，蒸馏水80mL。将结晶紫加入乙醇中混匀，草酸铵加入蒸馏水中混匀，将两液充分混匀后，静置48小时再使用。

革兰氏碘液。碘1。0g，碘化钾2。0g，蒸馏水300mL。先取少量蒸馏水，将碘与碘化钾共同加入蒸馏水中混匀后，用蒸馏水定容。

番红（Saframine O）染液。番红0。25g，95%乙醇10mL。将番红溶解于95%乙醇中，充分混匀后用蒸馏水定容至100mL。

5mol/L NaCl 溶液。NaCl 29。22g，双蒸水80mL。将二者混匀后，定容至100mL，高压蒸汽灭菌15min，室温保藏。

CATB/NaCl 溶液（0。7mol/L NaCl，10%CATB）。NaCl 4。1g，双蒸水100mL，CTAB10g。将NaCl溶于适量双蒸水（少于100mL）用磁力搅拌器搅拌，期间缓慢加入CTAB，可加热，待其冷却后，用双蒸水定容至100mL，高压蒸汽灭菌15min，室温保藏。