目录

引言 6

1全长Auracyanin基因的克隆 7

1。1  实验材料 7

1。1。1 主要实验仪器 7

1。1。2 主要实验试剂 7

1。1。3 主要培养基、试剂的配制 7

1。2 实验方法 8

1。2。1嗜热光合绿丝菌总基因组DNA的提取 8

1。2。2目的基因的PCR扩增 8

1。2。3 PCR产物切胶回收 9

1。2。4重组克隆质粒pEASY-E2-Au的构建 10

1。2。5重组克隆质粒转化E。coli的Trans-T1感受态细胞 10

1。2。6菌落PCR鉴定挑选阳性重组子 10

1。2。7试剂盒小量提取阳性重组子的质粒 11

1。2。8重组质粒转化E。coli的BL21（DE3）感受态细胞 12

1。2。9阳性菌落的PCR鉴定 12

1。3 实验结果与分析 13

1。3。1目的基因的PCR扩增 13

1。3。2重组克隆质粒转化E。coli的Trans-T1感受态细胞后的菌落PCR鉴定 13

1。3。3重组质粒转化E。coli的BL21（DE3）感受态细胞的菌落PCR鉴定 14

2 全长Auracyanin的异源表达与纯化 15

2。1 实验材料 15

2。1。1 主要实验仪器 15

2。1。2 主要实验试剂 15

2。1。3 主要试剂的配制 15

2。2实验方法 16

2。2。1 目的蛋白的诱导表达 16

2。2。2 确定目的蛋白表达位置 16

2。2。3 目的蛋白诱导表达条件的优化 17

2。2。4 重力柱亲和层析预纯化目的蛋白 17

2。2。5离子交换纯化目的蛋白 18

2。2。6 凝胶过滤进一步纯化目的蛋白 19

2。2。7 Western bolt鉴定目的蛋白 19

2。3 实验结果与分析 20

2。3。1 目的蛋白表达定位分析及表达条件优化 20

2。3。2 重力柱亲和层析预纯化目的蛋白 21

2。3。3 离子交换纯化目的蛋白 21

2。3。4 凝胶过滤进一步纯化目的蛋白 22

2。3。5 Western bolt鉴定目的蛋白 23

3 讨论 23

参考文献： 25

致谢 26

附录 26

引言

在自然界中有六个门类的细菌能够进行光合作用，根据是否产生氧气可以将其分为两大类，一类是不放氧光合细菌，包括紫色细菌、绿硫细菌、绿色非硫细菌和太阳杆菌等较早出现在地球上的类群。其中的绿色非硫细菌[1]，也称丝状不放氧光合细菌（Filamentous anoxygenic phototroph，简称光合绿丝菌FAPs）。另外一类是蓝细菌，是随后进化的放氧光合细菌，其中的一支最终进化为植物。