摘要：胡萝卜软腐果胶杆菌胡萝卜亚种（Pectobacterterium carotovorum subsp。 carotovorum, 以下简称Pcc）是引起细菌性软腐病的重要病原菌。它寄主广泛，可侵染多种经济作物及观赏性植物，并且造成严重的经济损失。本实验通过基因进行定向敲除，获得胡萝卜软腐果胶杆菌rsmB基因的缺失突变株，完成游动性、沉降性、生物膜测定等生物学特性测定、白菜叶柄致病性测定以及果胶酶、蛋白酶、纤维素酶等致病因子测定，探索rsmB基因的缺失突变株与Pcc致病性的关系。77897

毕业论文关键词：Pcc；rsmB；致病性

Pathogenicity related functional analysis of rsmB gene from Pectobacterium carotovorum subsp。 carotovorum

Abstract：Pectobacterium carotovorum subsp。 carotovorum (Pcc) is an important bacterial pathogen causing bacterial soft rot disease in a wide range ornamental plants and crops and cause economic loss。 In this study, to determine whether the rsmB gene is required for the virulence of P。 carotovorum, a gene-deletion mutant of rsmB gene and the complementary strains were constructed。 The results of phenotype-test of the wild-type and derivate strains, including motility, biofilm formation, exo-enzyme activity virulence, etc。, reveal that rsmB negatively regulates the pathogenicity of P。 carotovorum subsp。carotovorum。

Key words: Pcc; rsmB; Pathogenicity

目  录

摘要4

关键词4

Abstract4

Key words4

引言（或绪论）4

1材料与方法5

1。1材料 5

1。1。1供试菌株、质粒及培养条件5

1。1。2培养基5

1。1。3抗生素及抗生素浓度6

1。1。4菌株培养及保存6

1。1．5主要试剂和仪器6

1。1．6引物和限制性内切酶6

1。2缺失突变体的构建6

1。2。1质粒的提取6

1。2。2DNA的酶切7

1。2。3化学感受态细胞的制备7

1。2。4化学转化7

1。2。5 DNA片段的PCR扩增和纯化7

1。2。6两亲交配得到的突变缺失体8

1。3致病性的测定8

1。4相关生物学特性的测定8

1。4。1游动性测定8

1。4。2沉降性测定8

1。4。3生物膜活性测定8

1。5相关致病因子的测定9

1。5。1纤维素酶活性测定9

1。5。2蛋白酶活性测定9

1。5。3果胶酶活性测定9

1。5。4碳青霉烯抗生素9

2结果与分析9

2。1突变菌株的构建9

2。2致病性测定9

2。3生物学特性测定结果10

2。3。1游动性测定结果 10

2。3。2沉降性测定结果10

2。3。3生物膜测定结果10

2。3。4碳青霉烯抗生素10

2。4致病相关因子测定结果11

2。4。1纤维素酶活性测定结果11

2。4。2果胶酶活性测定结果11

2。4。3蛋白酶活性测定结果11

3讨论11

致谢11

参考文献12

彩色马蹄莲(Zantedeschia spp。)是高档的单子叶观赏植物。侵染彩色马蹄莲的病原菌分为三类：病毒、真菌和细菌。其中，细菌性病害的细菌性软腐病的发生是彩色马蹄莲生产中的最大难题，所有彩色马蹄莲的杂交种都不同程度地感病[1]。引起此类病害的主要病原菌有：胡萝卜软腐果胶杆菌胡萝卜亚种(Pcc，1998年前为 Erwinia carotovora subsp。 carotovora)、胡萝卜软腐果胶杆菌黑胫亚种(Pectobacterterium carotovorum subsp。 atroseptica, 1998年前为 Erwinia carotovora subsp。 atroseptica)和菊欧文氏菌(Dickeya dadantii,1998年前为 Erwinia chrysanthemi)[2~4]。其中胡萝卜软腐果胶杆菌胡萝卜亚种为我国细菌性软腐病的最主要病原细菌，可侵染多种寄主，包括十字花科、茄科、豆科、伞形科和葫芦科等多种蔬菜及多种观赏花卉植物[5~6]。