几种物质对细胞膜的通透性(2)
1. 材料、器具与方法
1.1 材料
鸡血和兔血，购于周口市农贸市场；蒸馏水、葡萄糖、柠檬酸钠、柠檬酸、氯化钠、醋酸铵、草酸铵、硫酸钠、无水乙醇，等，由周口师范学院生命科学与农学学院提供。
1.2 器具
高压灭菌锅、离心机、天平、移液管、计时秒表、试管、容量瓶、烧杯、试管架等，由周口师范学院生命科学与农学学院提供。
1.3 方法
1.3.1 抗凝剂阿氏液的制备
分别称取葡萄糖20.5 g、柠檬酸钠80 g、柠檬酸0.55 g、氯化钠4.2 g，溶解后定容至1000 ml，用柠檬酸钠调节pH到6.1，115 ℃下灭菌10 min后放入4 ℃冰箱保存，备用[5-6]。
1.3.2 抗凝鸡血及兔血的制备
取2个250 ml的烧杯，分别加入100 ml的阿氏液，并分别标记为抗凝鸡血和抗凝兔血，然后按5:1的体积比分别加入20 ml的新鲜鸡血和兔血，分别得到120 ml的抗凝鸡血和兔血[7-8]。
1.3.3 0.75%及0.9%的生理盐水的制备
0.75%的兔血生理盐水：称取氯化钠0.75 g，溶解后，倒入100 ml的容量瓶中，最后加入蒸馏水定容到100 ml，然后再贴上写有兔血生理盐水的标签。
0.9%的鸡血生理盐水：称取氯化钠0.90 g，溶解后，倒入100 ml的容量瓶中，最后加入蒸馏水定容到100 ml，然后再贴上写有鸡血生理盐水的标签。
1.3.4 10%的抗凝鸡血及兔血红细胞悬浮液的制备
抗凝鸡血红细胞悬浮液的制备：用移液管分别量取4 ml抗凝鸡血于6个刻度离心管中，2000 r/min离心10 min，弃上清，取沉淀；分别在所得的沉淀中加入适量的0.9%的鸡血生理盐水，轻轻摇匀，制成悬浮液，2000 r/min再离心10 min，取沉淀；重复上述操作，得到压积鸡血红细胞；将压积鸡血红细胞按照1:9的体积比加入0.9%的鸡血生理盐水，制得10%的抗凝鸡血红细胞悬液[9]。
抗凝兔血红细胞悬浮液的制备：用移液管分别量取4 ml抗凝兔血于6个刻度离心管内，2000 r/min离心10 min，弃上清，取沉淀；分别在所得的沉淀中加入适量的0.75%的兔血生理盐水，轻轻摇匀，制成悬浮液，2000 r/min再离心10 min，取沉淀；重复上述操作，得到压积兔血红细胞；将压积兔血红细胞按照1:9的体积比加入0.9%的兔血生理盐水，制得10%的抗凝兔血红细胞悬液[9]。
1.3.5 等渗溶液的制备
取7个烧杯和7个100 ml容量瓶，将烧杯和容量瓶依次标记为氯化钠、氯化铵、醋酸铵、硝酸钠、草酸铵、硫酸钠、葡萄糖，然后依次称取氯化钠0.99 g、氯化铵0.91 g、醋酸铵1.31 g、硝酸钠1.45 g、草酸铵1.70 g、硫酸钠1.70 g、葡萄糖5.76 g于各个烧杯中，各自溶解后，分别倒入标记好的相应的容量瓶中，再分别用蒸馏水定容至100 ml。
另取3个100 ml容量瓶，并依次标记为甘油、乙醇、丙酮，然后依次量取甘油2.33 ml、乙醇1.86 ml、丙酮2.38 ml于标记好的的容量瓶中，再分别用蒸馏水定容至100 ml。
1.3.6 溶血现象的观察
先取试管2支，分别标为鸡血和兔血，再向2支试管中各加入3 ml蒸馏水，最后再分别加入1 ml的抗凝鸡血和抗凝兔血红细胞悬浮液，轻轻晃动试管摇匀，注意观察是否发生溶血现象，如果发生溶血现象，则记录溶血时间。
同样地，其他10种溶质分子的等渗溶液也分别按照上述蒸馏水的操作方法来进行实验操作，观察是否发生溶血现象，如果发生溶血现象，则记录溶血时间。
实验设3次重复，溶血时间取平均值。
2. 结果与分析
2.1 溶血现象实验结果
不同溶质分子渗入红细胞的速度有所不同，因此不同的溶质分子引发红细胞产生溶血现象的时间不同，所以可以用红细胞发生溶血的时间来估算不同溶质分子对细胞膜通透性的影响程度[10]，本实验得到的溶血时间结果如表1所示：
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