3。3。2 7M尿素+4%SDS裂解液 7

3。3。3 RIPA裂解液 7

3。3。4 尿素+硫尿裂解液 7

3。3。5 尿素+Tris裂解液 8

3。3。6 0。1M乙酸铵/甲醇 8

3。3。7 100%硫酸铵 8

3。3。8 20％三氯乙酸（TCA）/丙酮溶液 8

3。3。9 90％丙酮溶液 8

3。3。10 10%过硫酸铵 8

3。3。11 考马斯亮蓝快速染色脱色液 9

3。4 实验方法与步骤 10

3。4。1 样品采集及前处理 10

3。4。2 建立两种方法提取尿液总蛋白 10

3。4。3 不同裂解液以及超声破碎对丙酮沉淀法提取尿液蛋白的影响 10

3。4。4 不同蛋白沉淀剂对提取尿液蛋白的影响 11

3。4。5 蛋白质浓度测定 12

3。4。6 SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳 13

3。4。7 凝胶染色脱色 14

4 实验结果与分析 15

4。1 两种方法提取尿液总蛋白结果 15

4。1。1 BSA标准曲线 15

4。1。2 蛋白质浓度和总量 15

4。1。3 SDS-PAGE电泳结果 16

4。2 不同裂解液以及超声破碎对丙酮沉淀法提取尿液蛋白的影响 16

4。2。1 BSA标准曲线 16

4。2。2 蛋白质浓度和总量 19

4。2。3 SDS-PAGE电泳结果 19

4。3 不同蛋白沉淀剂对提取尿液蛋白的影响 19

4。3。1 BSA标准曲线 20

4。3。2 蛋白质浓度和总量 20

4。3。3 SDS-PAGE电泳结果 21

4。4 TCA/丙酮沉淀法与超滤法的比较 21

4。4。1 BSA标准曲线 21

4。4。2 蛋白质浓度和总量 22

4。4。3 SDS-PAGE电泳结果 22

5 讨论 24

致  谢 25

参考文献 26

1 绪论

1。1 蛋白质

蛋白质在早期的研究中被称为朊，它是生命的物质基础。氨基酸脱水缩合形成肽链，经过盘绕折叠以及次级键卷曲折叠，最后聚合成蛋白质。氨基酸由对应基因所编码，遗传基因能够编码出20种标准氨基酸。蛋白质种类丰富，其拥有一级、二级、三级和四级结构。一级结构通过不同氨基酸残基的排列顺序形成不同的蛋白质，给予其丰富性，蛋白质二级结构对肽链进行折叠，使其拥有空间结构，不同的折叠方式拥有不同的化学性质，而其结构的多样性，让其种类更为复杂。蛋白质参与生命活动的每个过程，其发挥作用可以是一种蛋白质，也有可能是多种蛋白质相互结合共同作用，由多种蛋白质结合形成稳定的蛋白质复合物，共同发挥某种特定的功能，对生命活动进行调控。