(3)蛋白酶检测培养基
10%脱脂牛奶:称取脱脂奶粉10。0 g,用无菌水溶解并定容至100 mL,115℃,灭菌15 min。
蛋白质酶检测培养基:LB固体培养基100 mL + 10%脱脂牛奶10 mL。
(4)果胶酶检测培养基
将0。4 g酵母提取物、 0。4 g (NH4)2SO4、 4 mL 50%的甘油、0。4 g MgSO4、 0。5 g/100 mL多聚半乳糖醛酸钠(最后加)、 80 mL磷酸盐缓冲液(15 g Na2HPO4 + 0。7 g NaH2PO4·H2O + 1 L H2O, 调pH至8。0)、细菌琼脂粉(最后加)1。5 g/100 mL,加纯水搅拌溶解后定容至400 mL,以100 mL为一瓶分装后加入多聚半乳糖醛酸钠和细菌琼脂粉,121℃灭菌20 min。
(5)纤维素酶检测培养基
将0。1 g/100 mL羧甲基纤维素钠(最后加)、 2 g酵母提取物、 0。4 g (NH4)2SO4、 1。6 mL 50%甘油、 0。04 g MgSO4、 8 mL 50×磷酸盐缓冲液(350 g K2HPO4 + 100 g KH2PO4 + 1 L ddH2O, 调pH至6。9 – 7。1)、 1。5 g/100 mL细菌琼脂粉(最后加),加纯水搅拌溶解后定容至400 mL,以100 mL为一瓶分装后加入羧甲基纤维素钠和细菌琼脂粉,121 ℃灭菌20 min。
(6)本实验所用抗生素有硫酸庆大霉素(Gm),使用终浓度50 μg·mL-1、硫酸卡那霉素(Km),使用终浓度50 μg·mL-1、利福平(Rif),使用终浓度100 μg·mL-1。
1。1。4 引物及限制性内切酶 本实验所用引物及限制性内切酶见表2。